郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
4期
438-441
,共4页
黄丹丹%鲍朗%杨晓玲%邓仪昊%廖丹
黃丹丹%鮑朗%楊曉玲%鄧儀昊%廖丹
황단단%포랑%양효령%산의호%료단
结核分枝杆菌%MycP1%巨噬细胞%细胞毒性
結覈分枝桿菌%MycP1%巨噬細胞%細胞毒性
결핵분지간균%MycP1%거서세포%세포독성
目的:构建结核分枝杆菌MycP1蛋白原核表达系统.方法:构建pGEX-4T-1-Rv3883c重组质粒,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot法检测目标蛋白的表达情况.目标蛋白经亲和层析纯化后,以不同质量浓度MycP1作用于小鼠巨噬细胞ANA-1,48 h后XTT法检测活细胞数,同时测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力,以评价其细胞毒性.结果:成功构建pGEX-4T-1-Rv3883c质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,经鉴定,表达的融合蛋白为目标蛋白MycP1.该融合蛋白作用后可使ANA-1活细胞数下降(F=34.327,P<0.001),培养上清液中LDH活力升高(F=336.720,P<0.001).结论:成功构建了MycP1原核表达系统,目标蛋白对巨噬细胞有一定的毒性效应.
目的:構建結覈分枝桿菌MycP1蛋白原覈錶達繫統.方法:構建pGEX-4T-1-Rv3883c重組質粒,轉化大腸桿菌,經IPTG誘導錶達,採用SDS-PAGE和Western blot法檢測目標蛋白的錶達情況.目標蛋白經親和層析純化後,以不同質量濃度MycP1作用于小鼠巨噬細胞ANA-1,48 h後XTT法檢測活細胞數,同時測定細胞上清液中乳痠脫氫酶(LDH)活力,以評價其細胞毒性.結果:成功構建pGEX-4T-1-Rv3883c質粒,該質粒能在大腸桿菌中錶達,經鑒定,錶達的融閤蛋白為目標蛋白MycP1.該融閤蛋白作用後可使ANA-1活細胞數下降(F=34.327,P<0.001),培養上清液中LDH活力升高(F=336.720,P<0.001).結論:成功構建瞭MycP1原覈錶達繫統,目標蛋白對巨噬細胞有一定的毒性效應.
목적:구건결핵분지간균MycP1단백원핵표체계통.방법:구건pGEX-4T-1-Rv3883c중조질립,전화대장간균,경IPTG유도표체,채용SDS-PAGE화Western blot법검측목표단백적표체정황.목표단백경친화층석순화후,이불동질량농도MycP1작용우소서거서세포ANA-1,48 h후XTT법검측활세포수,동시측정세포상청액중유산탈경매(LDH)활력,이평개기세포독성.결과:성공구건pGEX-4T-1-Rv3883c질립,해질립능재대장간균중표체,경감정,표체적융합단백위목표단백MycP1.해융합단백작용후가사ANA-1활세포수하강(F=34.327,P<0.001),배양상청액중LDH활력승고(F=336.720,P<0.001).결론:성공구건료MycP1원핵표체계통,목표단백대거서세포유일정적독성효응.
