中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2003年
2期
162-167
,共6页
熊爱生%姚泉洪%彭日荷%陈建民%李贤%范惠琴
熊愛生%姚泉洪%彭日荷%陳建民%李賢%範惠琴
웅애생%요천홍%팽일하%진건민%리현%범혜금
β-葡萄糖苷酸酶%DNA改组%体外分子进化
β-葡萄糖苷痠酶%DNA改組%體外分子進化
β-포도당감산매%DNA개조%체외분자진화
β-葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因.以质粒pBI121中的GUS基因为基础,利用DNA改组方法,经DNase Ⅰ降解,Primerless PCR, Primer PCR对GUS基因进行了突变和改组,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG251中,构建了库容为108的突变体库.经过活性的筛选,得到活性提高的克隆,再以此为基础,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS24.基因测序显示,GUS24与GUS基因之间的同源性为99.7%,共有6个核苷酸位点发生了改变,分别是:379位的A突变为G,396位的T突变为C,711位的G突变为A,958位T突变为C,990位的T突变为C,1649位的A突变为G.核苷酸序列推导的氨基酸序列显示,3个氨基酸发生了突变,127位的Ser突变为Gly,320位的Trp突变为Arg,550位的Asn突变为Ser.X-gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS24基因表达的β-葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高3倍.
β-葡萄糖苷痠酶是在植物轉基因中廣汎應用的報告基因.以質粒pBI121中的GUS基因為基礎,利用DNA改組方法,經DNase Ⅰ降解,Primerless PCR, Primer PCR對GUS基因進行瞭突變和改組,然後將改組的GUS基因連接到原覈錶達載體pG251中,構建瞭庫容為108的突變體庫.經過活性的篩選,得到活性提高的剋隆,再以此為基礎,經過新的改組、篩選得到活性大幅度提高的剋隆GUS24.基因測序顯示,GUS24與GUS基因之間的同源性為99.7%,共有6箇覈苷痠位點髮生瞭改變,分彆是:379位的A突變為G,396位的T突變為C,711位的G突變為A,958位T突變為C,990位的T突變為C,1649位的A突變為G.覈苷痠序列推導的氨基痠序列顯示,3箇氨基痠髮生瞭突變,127位的Ser突變為Gly,320位的Trp突變為Arg,550位的Asn突變為Ser.X-gluc染色檢測和熒光測活結果顯示GUS24基因錶達的β-葡萄糖苷痠酶基較GUS基因錶達產物活性提高3倍.
β-포도당감산매시재식물전기인중엄범응용적보고기인.이질립pBI121중적GUS기인위기출,이용DNA개조방법,경DNase Ⅰ강해,Primerless PCR, Primer PCR대GUS기인진행료돌변화개조,연후장개조적GUS기인련접도원핵표체재체pG251중,구건료고용위108적돌변체고.경과활성적사선,득도활성제고적극륭,재이차위기출,경과신적개조、사선득도활성대폭도제고적극륭GUS24.기인측서현시,GUS24여GUS기인지간적동원성위99.7%,공유6개핵감산위점발생료개변,분별시:379위적A돌변위G,396위적T돌변위C,711위적G돌변위A,958위T돌변위C,990위적T돌변위C,1649위적A돌변위G.핵감산서렬추도적안기산서렬현시,3개안기산발생료돌변,127위적Ser돌변위Gly,320위적Trp돌변위Arg,550위적Asn돌변위Ser.X-gluc염색검측화형광측활결과현시GUS24기인표체적β-포도당감산매기교GUS기인표체산물활성제고3배.
