第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
6期
628-630,635
,共4页
龚小卫%彭毅%刘靖华%李志杰%邓鹏%秦清和%姜勇
龔小衛%彭毅%劉靖華%李誌傑%鄧鵬%秦清和%薑勇
공소위%팽의%류정화%리지걸%산붕%진청화%강용
ARPC2%载体构建%基因表达%蛋白纯化
ARPC2%載體構建%基因錶達%蛋白純化
ARPC2%재체구건%기인표체%단백순화
目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白.方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中.对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定.转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白.结果所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白.结论成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料.
目的構建人His-ARPC2融閤蛋白錶達載體,併在原覈細胞中進行錶達與純化,以研究其功能及鑒定與其相互作用的蛋白.方法採用PCR方法從人肝cDNA文庫擴增ARPC2基因編碼區,使用常規酶切、連接方法將其重組至pET-14b載體中.對暘性剋隆進行酶切、PCR和測序鑒定.轉化BL21(DE3)大腸桿菌株,用異丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)誘導融閤蛋白錶達,併利用Ni-NTA親和層析純化該融閤蛋白.結果所構建的人ARPC2的His融閤蛋白錶達載體是正確的,該載體可在大腸桿菌內高效錶達,用Ni-NTA純化穫得瞭相對分子質量約36000的融閤蛋白.結論成功構建瞭人His-ARPC2融閤蛋白錶達載體,併在原覈細胞中穫得瞭高效錶達和純化,為進一步研究ARPC2的生理功能提供瞭重要的實驗材料.
목적구건인His-ARPC2융합단백표체재체,병재원핵세포중진행표체여순화,이연구기공능급감정여기상호작용적단백.방법채용PCR방법종인간cDNA문고확증ARPC2기인편마구,사용상규매절、련접방법장기중조지pET-14b재체중.대양성극륭진행매절、PCR화측서감정.전화BL21(DE3)대장간균주,용이병기β-D류대반유당(IPTG)유도융합단백표체,병이용Ni-NTA친화층석순화해융합단백.결과소구건적인ARPC2적His융합단백표체재체시정학적,해재체가재대장간균내고효표체,용Ni-NTA순화획득료상대분자질량약36000적융합단백.결론성공구건료인His-ARPC2융합단백표체재체,병재원핵세포중획득료고효표체화순화,위진일보연구ARPC2적생리공능제공료중요적실험재료.
