细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2007年
4期
585-589
,共5页
蒋永华%孙筱放%郑育红%张文红%银益飞%廖宝平
蔣永華%孫篠放%鄭育紅%張文紅%銀益飛%廖寶平
장영화%손소방%정육홍%장문홍%은익비%료보평
小鼠品系%胚胎干细胞系%内细胞团%体外培养
小鼠品繫%胚胎榦細胞繫%內細胞糰%體外培養
소서품계%배태간세포계%내세포단%체외배양
探索高效的不同品系的小鼠胚胎干细胞的建系方法.B6D2F1(C57BL/6 × DBA/2)、129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4个不同品系小鼠,孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)+人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)促排,3.5天交配后(days post coitus,dpc)冲洗子宫取囊胚,或者2.5 dpc冲洗输卵管,卵裂球体外培养获取囊胚.囊胚种植到小鼠成纤维细胞饲养层上干细胞培养液培养,4～5天内细胞团扩增后玻璃毛细管挑出,种植到新的饲养层上过夜再行胰蛋白酶消化,3～4天传代一次.对所建立的小鼠ES细胞系进行形态学、染色体核型、AKP染色、体内外分化能力,干细胞分子标记物荧光免疫染色等鉴定.获得10株小鼠胚胎干细胞,具有典型的胚胎干细胞生长特性,符合ES细胞的鉴定标准.结果表明成功的建立了来自B6D2F1(C57BL/6×DBA/2)、129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4个不同品系小鼠的10株ES细胞系.内细胞团挑出过夜增殖后消化的培养方法可能有助于提高ES细胞的建系率.
探索高效的不同品繫的小鼠胚胎榦細胞的建繫方法.B6D2F1(C57BL/6 × DBA/2)、129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4箇不同品繫小鼠,孕馬血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)+人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)促排,3.5天交配後(days post coitus,dpc)遲洗子宮取囊胚,或者2.5 dpc遲洗輸卵管,卵裂毬體外培養穫取囊胚.囊胚種植到小鼠成纖維細胞飼養層上榦細胞培養液培養,4～5天內細胞糰擴增後玻璃毛細管挑齣,種植到新的飼養層上過夜再行胰蛋白酶消化,3～4天傳代一次.對所建立的小鼠ES細胞繫進行形態學、染色體覈型、AKP染色、體內外分化能力,榦細胞分子標記物熒光免疫染色等鑒定.穫得10株小鼠胚胎榦細胞,具有典型的胚胎榦細胞生長特性,符閤ES細胞的鑒定標準.結果錶明成功的建立瞭來自B6D2F1(C57BL/6×DBA/2)、129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4箇不同品繫小鼠的10株ES細胞繫.內細胞糰挑齣過夜增殖後消化的培養方法可能有助于提高ES細胞的建繫率.
탐색고효적불동품계적소서배태간세포적건계방법.B6D2F1(C57BL/6 × DBA/2)、129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C등4개불동품계소서,잉마혈청촉성선격소(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)+인융모막촉성선격소(human chorionic gonadotropin,HCG)촉배,3.5천교배후(days post coitus,dpc)충세자궁취낭배,혹자2.5 dpc충세수란관,란렬구체외배양획취낭배.낭배충식도소서성섬유세포사양층상간세포배양액배양,4～5천내세포단확증후파리모세관도출,충식도신적사양층상과야재행이단백매소화,3～4천전대일차.대소건립적소서ES세포계진행형태학、염색체핵형、AKP염색、체내외분화능력,간세포분자표기물형광면역염색등감정.획득10주소서배태간세포,구유전형적배태간세포생장특성,부합ES세포적감정표준.결과표명성공적건립료래자B6D2F1(C57BL/6×DBA/2)、129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C등4개불동품계소서적10주ES세포계.내세포단도출과야증식후소화적배양방법가능유조우제고ES세포적건계솔.
