CAJ | 학술논문

目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定.方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOS cDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株.将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例(1:1、1:2、1:5、1:10)共培养,加入亚刺激剂量(200 ng/ml)的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以 1:1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照.结果:成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株.3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化(P＜0.05或P＜0.01),细胞比例为1:1时抑制率最大,分别为(68±5.9)%、(44.08±3.26)%.结论:成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础.
목적:구건휴대인가유도공자격분자(inducible costimulator molecule,ICOS)기인적중조역전록병독재체,사선은정표체ICOS단백적CHO세포주,병대기생물학활성진행감정.방법:RT-PCR법종인PBMC중획취ICOS cDNA,정향극륭도역전록병독재체상,제비역전록병독중조체pMSCV-ICOS;경병독포장세포포장후항성사선출산고적도병독적세포주,용고적도병독상청감염CHO세포,항성사선출은정표체세포주.장CHO-ICOS세포화PBMC이불동비례(1:1、1:2、1:5、1:10)공배양,가입아자격제량(200 ng/ml)적항인CD3항체,채용3H-TdR참입법검측PBMC적증식,류식세포의검측T세포표면활화분자CD25표체정황,병이CHO-pMSCV세포화PBMC이 1:1비례공배양작위음성대조이급미처리적PBMC작위공백대조.결과:성공구건역전록병독중조체pMSCV-ICOS,사선출은정표체ICOS단백적CHO세포주.3H-TdR참입법화류식세포의검측결과표명,여음성대조급공백대조상비,CHO-ICOS세포여PBMC공배양능억제CD3항체유도적PBMC증식급활화(P＜0.05혹P＜0.01),세포비례위1:1시억제솔최대,분별위(68±5.9)%、(44.08±3.26)%.결론:성공건립구유생물학활성적막은정표체인ICOS단백적CHO세포주,위금후연구전정료기출.