高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2008年
5期
537-542
,共6页
邓树轩%程安春%汪铭书%曹平%尹念春%曹省艳%张振华%颜彬
鄧樹軒%程安春%汪銘書%曹平%尹唸春%曹省豔%張振華%顏彬
산수헌%정안춘%왕명서%조평%윤념춘%조성염%장진화%안빈
肠炎沙门氏菌(SE)%荧光定量聚合酶链武反应(FQ-PCR)%种特异性
腸炎沙門氏菌(SE)%熒光定量聚閤酶鏈武反應(FQ-PCR)%種特異性
장염사문씨균(SE)%형광정량취합매련무반응(FQ-PCR)%충특이성
根据肠炎沙门氏茵(SE)种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针,首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断方法.该法在SE DNA含量为9×10 8～9×10 4拷贝有较好的线性关系;检测SE DNA模板的灵敏度为4拷贝/μL,检测SE细菌数的灵敏度为6 CFU/mL;特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应.分别应用该技术和传统细菌分离法检测60份来自人工感染鸭、小白鼠和肉兔的心、肝、脑和直肠粪便,结果显示两种方法对心、肝、直肠粪便的阳性检测结果符合率为100%,而FQ-PCR对脑的阳性检测率极显著(P＜0.01)高于细菌分离.研究结果表明,该方法快速、灵敏、特异、重复性好且能实时定量检测,可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例检测、SE体内动态分布规律研究及其分子流行病学调查.
根據腸炎沙門氏茵(SE)種特異性DNA序列,設計閤成瞭一對能特異性擴增130bp片段的引物和TaqMan探針,首次建立瞭SE的種特異性熒光定量聚閤酶鏈式反應(FQ-PCR)診斷方法.該法在SE DNA含量為9×10 8～9×10 4拷貝有較好的線性關繫;檢測SE DNA模闆的靈敏度為4拷貝/μL,檢測SE細菌數的靈敏度為6 CFU/mL;特異性試驗錶明隻對SE基因組呈暘性反應.分彆應用該技術和傳統細菌分離法檢測60份來自人工感染鴨、小白鼠和肉兔的心、肝、腦和直腸糞便,結果顯示兩種方法對心、肝、直腸糞便的暘性檢測結果符閤率為100%,而FQ-PCR對腦的暘性檢測率極顯著(P＜0.01)高于細菌分離.研究結果錶明,該方法快速、靈敏、特異、重複性好且能實時定量檢測,可用于SE分離鑒定、SE感染疑似病例檢測、SE體內動態分佈規律研究及其分子流行病學調查.
근거장염사문씨인(SE)충특이성DNA서렬,설계합성료일대능특이성확증130bp편단적인물화TaqMan탐침,수차건립료SE적충특이성형광정량취합매련식반응(FQ-PCR)진단방법.해법재SE DNA함량위9×10 8～9×10 4고패유교호적선성관계;검측SE DNA모판적령민도위4고패/μL,검측SE세균수적령민도위6 CFU/mL;특이성시험표명지대SE기인조정양성반응.분별응용해기술화전통세균분리법검측60빈래자인공감염압、소백서화육토적심、간、뇌화직장분편,결과현시량충방법대심、간、직장분편적양성검측결과부합솔위100%,이FQ-PCR대뇌적양성검측솔겁현저(P＜0.01)고우세균분리.연구결과표명,해방법쾌속、령민、특이、중복성호차능실시정량검측,가용우SE분리감정、SE감염의사병례검측、SE체내동태분포규률연구급기분자류행병학조사.
