W544F定点突变提高苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的稳定性
W544F정점돌변제고소운금간균Cry1Ac단백적은정성
Stability Improvement of the Cry1Ac Protein by Site-directed Mutagenesis of W544F
  • 万方数据
    高等学校化学学报 고등학교화학학보
    CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
    2008年 10期 1999-2002 ,共4页

    王发祥%夏立秋%丁学知%赵新民%单世平%莫湘涛%张友明%喻子牛

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    Cry1Ac蛋白%定点突变%色氨酸%苯丙氨酸%稳定性 Cry1Ac蛋白%定點突變%色氨痠%苯丙氨痠%穩定性
    Cry1Ac단백%정점돌변%색안산%분병안산%은정성
    W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个"螺旋桨状"的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的原毒素对紫外照射、胰蛋白酶处理和室温存贮的稳定性相对于野生Cry1Ac都有一定程度的提高;经原子力显微镜观察,发现W544F产生的晶体两个顶点间的垂直距离比野生型Cry1Ac约长0.6μm,且晶体表面不及野生型光滑;此外,W544F与野生Cry1Ac的杀虫活性相似,但经过紫外光照射9h后,其保留的杀虫活性比野生型高4倍以上.W544F突变较好地解决了Cry1Ac毒素蛋白田间应用不持久的问题,具有重要的应用价值.
    W544시Cry1Ac단백상독특우기타Cry류단백적일개안기산,타여F578화F604일기조성일개"라선장상"적소수족,통과소수상호작용유지단백적삼유결구은정.본연구통과정점돌변장W544보수지체환위분병안산,SDS-PAGE분석결과표명기순화적원독소대자외조사、이단백매처리화실온존저적은정성상대우야생Cry1Ac도유일정정도적제고;경원자력현미경관찰,발현W544F산생적정체량개정점간적수직거리비야생형Cry1Ac약장0.6μm,차정체표면불급야생형광활;차외,W544F여야생Cry1Ac적살충활성상사,단경과자외광조사9h후,기보류적살충활성비야생형고4배이상.W544F돌변교호지해결료Cry1Ac독소단백전간응용불지구적문제,구유중요적응용개치.
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