CAJ | 학술논문

本研究采用RNA干扰技术探讨血管内皮生长因子(VEGF)对耐药白血病细胞 K562/A02药物敏感性的影响及其机制.针对人vegf基因合成3个特异性shRNA干扰片段,采用脂质体介导的方法将其导入 K562/A02 细胞,用RT-PCR检测 vegf及mrpl的 mRNA 表达水平,用Western blot检测VEGF、MRPI、AKT及P-AKT的蛋白表达情况,用MTT法检测阿霉素对各组细胞的半数抑制浓度(IC50),用流式细胞术检测细胞凋亡、胞内罗丹明123(Rh0123)积聚情况.结果表明:转染vegf shRNA后,K562/A02 细胞 vegf 的 mRNA 表达下调,其中vegf shRNA2组和vegf shRNA3 组与HK组比较有显著差异(p<0.05),以vegf shRNA3组最显著,VEGF蛋白表达也出现下调,与mRNA的表达基本一致;MTT检测结果显示阳性转染组对阿霉素的敏感性增加,其中vegf shRNA2组和vegf shRNA3组的半数抑制浓度(IC50)与HK组比较具有显著的统计学差异(p<0.05);阳性转染组胞内Rho123 积聚增多,与HK组比较均有统计学差异(p<0.05);阳性转染组细胞凋亡增加,其中vegf shRNA2组和 vegf shRNA3组与HK组比较有统计学意义(p<0.05);阳性转染组MRPI mRNA蛋白及表达均下调,以vegf shRNA3组下调最显著;阳性转染组P-AKT的表达水平低于对照组,以vegf shRNA3组最明显,而总的 AKT 无明显变化.结论:vegf shR-NA 可以抑制vegf的基因的转录及翻译,从而增加耐药白血病细胞对阿霉素的敏感性,其机制可能是vegf shRNA通过抑制P13K/AKT信号转导通路的活化而促进细胞凋亡及下调MRP1的表达.
본연구채용RNA간우기술탐토혈관내피생장인자(VEGF)대내약백혈병세포 K562/A02약물민감성적영향급기궤제.침대인vegf기인합성3개특이성shRNA간우편단,채용지질체개도적방법장기도입 K562/A02 세포,용RT-PCR검측 vegf급mrpl적 mRNA 표체수평,용Western blot검측VEGF、MRPI、AKT급P-AKT적단백표체정황,용MTT법검측아매소대각조세포적반수억제농도(IC50),용류식세포술검측세포조망、포내라단명123(Rh0123)적취정황.결과표명:전염vegf shRNA후,K562/A02 세포 vegf 적 mRNA 표체하조,기중vegf shRNA2조화vegf shRNA3 조여HK조비교유현저차이(p<0.05),이vegf shRNA3조최현저,VEGF단백표체야출현하조,여mRNA적표체기본일치;MTT검측결과현시양성전염조대아매소적민감성증가,기중vegf shRNA2조화vegf shRNA3조적반수억제농도(IC50)여HK조비교구유현저적통계학차이(p<0.05);양성전염조포내Rho123 적취증다,여HK조비교균유통계학차이(p<0.05);양성전염조세포조망증가,기중vegf shRNA2조화 vegf shRNA3조여HK조비교유통계학의의(p<0.05);양성전염조MRPI mRNA단백급표체균하조,이vegf shRNA3조하조최현저;양성전염조P-AKT적표체수평저우대조조,이vegf shRNA3조최명현,이총적 AKT 무명현변화.결론:vegf shR-NA 가이억제vegf적기인적전록급번역,종이증가내약백혈병세포대아매소적민감성,기궤제가능시vegf shRNA통과억제P13K/AKT신호전도통로적활화이촉진세포조망급하조MRP1적표체.