农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
6期
1120-1126
,共7页
施伟%金圣塔%张海峰%王婷%陈集双%廖乾生
施偉%金聖塔%張海峰%王婷%陳集雙%廖乾生
시위%금골탑%장해봉%왕정%진집쌍%료건생
番茄不孕病毒%基因组序列%侵染性克隆%3a基因
番茄不孕病毒%基因組序列%侵染性剋隆%3a基因
번가불잉병독%기인조서렬%침염성극륭%3a기인
番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)可侵染包括藜科(Chenopodiaceae)、茄科(Solanaceae)等在内的24个双子叶家族和3个单子叶家族的100多种植物,是具有重要经济价值的植物病毒之一.为研究TAV BJ株系(Tomato aspermy virus,TAV-BJ)的基因组功能,本实验对TAV-BJ基因组克隆测序,并构建侵染性克隆.以TAV-BJ侵染心叶烟(ic otiana glutinosa)的总RNA为模板,RT-PCR获得其RNA2和RNA3；以TAV-BJ的dsRNA为模板,RT-PCR获得全长RNA1,目的片段PCR产物克隆测序获得TAV-BJ基因组全序列信息.RNA1全长3 409 nt,编码994个氨基酸的1a蛋白；RNA2全长3 023 nt,含2个开放阅读框(open reading frame,ORF),2a ORF编码829个氨基酸的2a蛋白,2b ORF编码78个氨基酸的2b蛋白；RNA3全长为2 216 nt,包含2个ORF,3a ORF编码247个氨基酸的3a蛋白,外壳蛋白(coat protein,CP)ORF 编码219个氨基酸的CP蛋白(TAV-BJ基因组RNA1、2和3 GenBank登录号分别为HQ424163,HQ424164和HQ424165).TAV-BJ基因组cDNA克隆体外转录成RNA并接种于心叶烟上,结果表明转录产物在寄主上的症状反应和TAV-BJ病毒粒子RNA的接种相一致,TAV-BJ基因组cDNA侵染性克隆具有活性.由TAV-BJ各个基因片段与缺失2b基因的黄瓜花叶病毒Fny株系(Cucumber mosaic virus,CMV-Fny△2b)构建的假重组病毒接种于心叶烟,结果显示TAV-BJ的RNA2和RNA3能恢复CMV-Fny△2b在寄主上症状反应.嵌合型RNA3F3aTcp和RNA3T3aFcp的症状反应结果表明,F1F2△2bRNA3 T3aFcp在寄主上产生花叶症状与F1 F2△2bT3相一致.本研究获得TAV-BJ的基因组序列,成功构建侵染性克隆,同时发现TAV-BJ的3a基因具有CMV-Fny的2b基因的某些功能.
番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)可侵染包括藜科(Chenopodiaceae)、茄科(Solanaceae)等在內的24箇雙子葉傢族和3箇單子葉傢族的100多種植物,是具有重要經濟價值的植物病毒之一.為研究TAV BJ株繫(Tomato aspermy virus,TAV-BJ)的基因組功能,本實驗對TAV-BJ基因組剋隆測序,併構建侵染性剋隆.以TAV-BJ侵染心葉煙(ic otiana glutinosa)的總RNA為模闆,RT-PCR穫得其RNA2和RNA3；以TAV-BJ的dsRNA為模闆,RT-PCR穫得全長RNA1,目的片段PCR產物剋隆測序穫得TAV-BJ基因組全序列信息.RNA1全長3 409 nt,編碼994箇氨基痠的1a蛋白；RNA2全長3 023 nt,含2箇開放閱讀框(open reading frame,ORF),2a ORF編碼829箇氨基痠的2a蛋白,2b ORF編碼78箇氨基痠的2b蛋白；RNA3全長為2 216 nt,包含2箇ORF,3a ORF編碼247箇氨基痠的3a蛋白,外殼蛋白(coat protein,CP)ORF 編碼219箇氨基痠的CP蛋白(TAV-BJ基因組RNA1、2和3 GenBank登錄號分彆為HQ424163,HQ424164和HQ424165).TAV-BJ基因組cDNA剋隆體外轉錄成RNA併接種于心葉煙上,結果錶明轉錄產物在寄主上的癥狀反應和TAV-BJ病毒粒子RNA的接種相一緻,TAV-BJ基因組cDNA侵染性剋隆具有活性.由TAV-BJ各箇基因片段與缺失2b基因的黃瓜花葉病毒Fny株繫(Cucumber mosaic virus,CMV-Fny△2b)構建的假重組病毒接種于心葉煙,結果顯示TAV-BJ的RNA2和RNA3能恢複CMV-Fny△2b在寄主上癥狀反應.嵌閤型RNA3F3aTcp和RNA3T3aFcp的癥狀反應結果錶明,F1F2△2bRNA3 T3aFcp在寄主上產生花葉癥狀與F1 F2△2bT3相一緻.本研究穫得TAV-BJ的基因組序列,成功構建侵染性剋隆,同時髮現TAV-BJ的3a基因具有CMV-Fny的2b基因的某些功能.
번가불잉병독(Tomato aspermy virus,TAV)가침염포괄려과(Chenopodiaceae)、가과(Solanaceae)등재내적24개쌍자협가족화3개단자협가족적100다충식물,시구유중요경제개치적식물병독지일.위연구TAV BJ주계(Tomato aspermy virus,TAV-BJ)적기인조공능,본실험대TAV-BJ기인조극륭측서,병구건침염성극륭.이TAV-BJ침염심협연(ic otiana glutinosa)적총RNA위모판,RT-PCR획득기RNA2화RNA3；이TAV-BJ적dsRNA위모판,RT-PCR획득전장RNA1,목적편단PCR산물극륭측서획득TAV-BJ기인조전서렬신식.RNA1전장3 409 nt,편마994개안기산적1a단백；RNA2전장3 023 nt,함2개개방열독광(open reading frame,ORF),2a ORF편마829개안기산적2a단백,2b ORF편마78개안기산적2b단백；RNA3전장위2 216 nt,포함2개ORF,3a ORF편마247개안기산적3a단백,외각단백(coat protein,CP)ORF 편마219개안기산적CP단백(TAV-BJ기인조RNA1、2화3 GenBank등록호분별위HQ424163,HQ424164화HQ424165).TAV-BJ기인조cDNA극륭체외전록성RNA병접충우심협연상,결과표명전록산물재기주상적증상반응화TAV-BJ병독입자RNA적접충상일치,TAV-BJ기인조cDNA침염성극륭구유활성.유TAV-BJ각개기인편단여결실2b기인적황과화협병독Fny주계(Cucumber mosaic virus,CMV-Fny△2b)구건적가중조병독접충우심협연,결과현시TAV-BJ적RNA2화RNA3능회복CMV-Fny△2b재기주상증상반응.감합형RNA3F3aTcp화RNA3T3aFcp적증상반응결과표명,F1F2△2bRNA3 T3aFcp재기주상산생화협증상여F1 F2△2bT3상일치.본연구획득TAV-BJ적기인조서렬,성공구건침염성극륭,동시발현TAV-BJ적3a기인구유CMV-Fny적2b기인적모사공능.
