中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2012年
5期
29-32
,共4页
黄文明%徐廷川%张亮权%张得玉%张民泽%张桂红
黃文明%徐廷川%張亮權%張得玉%張民澤%張桂紅
황문명%서정천%장량권%장득옥%장민택%장계홍
圆环病毒2型%ORF3%序列分析%真核表达
圓環病毒2型%ORF3%序列分析%真覈錶達
원배병독2형%ORF3%서렬분석%진핵표체
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)的核酸序列,设计了1对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中扩增出了ORF3基因,将其克隆到高效真核表达载体pEGFP- N2中,筛选出含有ORF3基因的重组质粒,命名为pEGFP-N2-ORF3.对此重组质粒进行测序分析,结果表明,克隆的ORF3基因与其他PCV2的ORF3核苷酸序列相似性为96.2％-99.0％,氨基酸序列同源性为90.5 ％～98.1％.将重组质粒纯化后转染COS-7细胞,用PCR方法扩增出了特征性的基因片段,并采用特异性单抗进行间接免疫荧光,结果转染pEGFP- N2-ORF3重组蛋白在细胞核和细胞浆中均有表达,尤其在细胞核中表达量较高,且对细胞有一定的毒性.本研究为进一步探讨ORF3的结构和功能提供理论依据.
根據GenBank中豬圓環病毒2型(PCV2)的覈痠序列,設計瞭1對引物,採用PCR方法從疑似斷奶仔豬多繫統衰竭綜閤徵(PMWS)的死亡仔豬病料中擴增齣瞭ORF3基因,將其剋隆到高效真覈錶達載體pEGFP- N2中,篩選齣含有ORF3基因的重組質粒,命名為pEGFP-N2-ORF3.對此重組質粒進行測序分析,結果錶明,剋隆的ORF3基因與其他PCV2的ORF3覈苷痠序列相似性為96.2％-99.0％,氨基痠序列同源性為90.5 ％～98.1％.將重組質粒純化後轉染COS-7細胞,用PCR方法擴增齣瞭特徵性的基因片段,併採用特異性單抗進行間接免疫熒光,結果轉染pEGFP- N2-ORF3重組蛋白在細胞覈和細胞漿中均有錶達,尤其在細胞覈中錶達量較高,且對細胞有一定的毒性.本研究為進一步探討ORF3的結構和功能提供理論依據.
근거GenBank중저원배병독2형(PCV2)적핵산서렬,설계료1대인물,채용PCR방법종의사단내자저다계통쇠갈종합정(PMWS)적사망자저병료중확증출료ORF3기인,장기극륭도고효진핵표체재체pEGFP- N2중,사선출함유ORF3기인적중조질립,명명위pEGFP-N2-ORF3.대차중조질립진행측서분석,결과표명,극륭적ORF3기인여기타PCV2적ORF3핵감산서렬상사성위96.2％-99.0％,안기산서렬동원성위90.5 ％～98.1％.장중조질립순화후전염COS-7세포,용PCR방법확증출료특정성적기인편단,병채용특이성단항진행간접면역형광,결과전염pEGFP- N2-ORF3중조단백재세포핵화세포장중균유표체,우기재세포핵중표체량교고,차대세포유일정적독성.본연구위진일보탐토ORF3적결구화공능제공이론의거.
