血栓与止血学
血栓與止血學
혈전여지혈학
CHINESE JOURNAL OF THROMBOSIS AND HEMOSTASIS
2012年
3期
103-105
,共3页
叶絮%刘晓力%丁秋兰%冯莹%王学锋%周旭红
葉絮%劉曉力%丁鞦蘭%馮瑩%王學鋒%週旭紅
협서%류효력%정추란%풍형%왕학봉%주욱홍
蛋白C%定点突变%体外表达
蛋白C%定點突變%體外錶達
단백C%정점돌변%체외표체
目的 对一个新发现的蛋白C( protein C,PC)基因突变PC E29K进行体外表达研究以探讨其导致PC缺陷的分子发病机制.方法 采用定点突变方法构建PC E29K突变表达质粒,脂质体法转染COS-7细胞、培养.采用ELISA法测定培养上清液和细胞裂解液中的PC∶Ag,用激光共聚焦显微镜对培养细胞进行细胞免疫荧光染色分析.结果 转染了突变质粒的Cos-7细胞培养上清中PC∶Ag的含量为野生型的23.7％,细胞裂解液中PC∶Ag的含量为野生型的81.1％.PC E29K突变型蛋白多在内质网中滞留,在高尔基体中定位减少.结论 PC E29K仅有部分从细胞内分泌出来,且部分在细胞内降解,因此,分泌障碍和部分降解加速是该突变导致PC缺陷的直接原因.
目的 對一箇新髮現的蛋白C( protein C,PC)基因突變PC E29K進行體外錶達研究以探討其導緻PC缺陷的分子髮病機製.方法 採用定點突變方法構建PC E29K突變錶達質粒,脂質體法轉染COS-7細胞、培養.採用ELISA法測定培養上清液和細胞裂解液中的PC∶Ag,用激光共聚焦顯微鏡對培養細胞進行細胞免疫熒光染色分析.結果 轉染瞭突變質粒的Cos-7細胞培養上清中PC∶Ag的含量為野生型的23.7％,細胞裂解液中PC∶Ag的含量為野生型的81.1％.PC E29K突變型蛋白多在內質網中滯留,在高爾基體中定位減少.結論 PC E29K僅有部分從細胞內分泌齣來,且部分在細胞內降解,因此,分泌障礙和部分降解加速是該突變導緻PC缺陷的直接原因.
목적 대일개신발현적단백C( protein C,PC)기인돌변PC E29K진행체외표체연구이탐토기도치PC결함적분자발병궤제.방법 채용정점돌변방법구건PC E29K돌변표체질립,지질체법전염COS-7세포、배양.채용ELISA법측정배양상청액화세포렬해액중적PC∶Ag,용격광공취초현미경대배양세포진행세포면역형광염색분석.결과 전염료돌변질립적Cos-7세포배양상청중PC∶Ag적함량위야생형적23.7％,세포렬해액중PC∶Ag적함량위야생형적81.1％.PC E29K돌변형단백다재내질망중체류,재고이기체중정위감소.결론 PC E29K부유부분종세포내분비출래,차부분재세포내강해,인차,분비장애화부분강해가속시해돌변도치PC결함적직접원인.
