微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
1期
53-57
,共5页
卢建红%龙进学%邵卫星%韦栋平%刘秀梵
盧建紅%龍進學%邵衛星%韋棟平%劉秀梵
로건홍%룡진학%소위성%위동평%류수범
禽流感病毒%H5亚型%反向遗传操作技术%基因重排%致弱
禽流感病毒%H5亞型%反嚮遺傳操作技術%基因重排%緻弱
금류감병독%H5아형%반향유전조작기술%기인중배%치약
选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV),缺失其HA基因裂解序列的4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL,将修饰的HA基因克隆入转录/表达载体pHW2000、构建质粒pHW524-HA,将该毒株和H9N2亚型毒株的NA全基因分别克隆入pHW2000,构建质粒pHW506-NA和pHW206-NA.将pHW524-HA与pHW506-NA或pHW206-NA组合、均用A/WSN/33(H1N1)提供6个内部基因,两个组合的8个质粒分别共转染COS-1细胞,产生了H5N1和H5N2两个亚型的基因重排病毒.通过在鸡胚中的连续传代和适应,2个重组病毒血凝价上升到1:29、表面基因稳定、对6周龄SPF鸡不表现致病性,H5N2重组病毒对鸡胚的毒力低于H5N1病毒.这种尝试证明反向遗传操作技术是研究AIV致病性和构建疫苗候选株的有用工具.
選擇一株鵝源H5N1亞型禽流感病毒(AIV),缺失其HA基因裂解序列的4箇堿性氨基痠、使HA裂解模式由高緻病性的PQRERRRKKR↓GL突變為低緻病性的PQRESR↓GL,將脩飾的HA基因剋隆入轉錄/錶達載體pHW2000、構建質粒pHW524-HA,將該毒株和H9N2亞型毒株的NA全基因分彆剋隆入pHW2000,構建質粒pHW506-NA和pHW206-NA.將pHW524-HA與pHW506-NA或pHW206-NA組閤、均用A/WSN/33(H1N1)提供6箇內部基因,兩箇組閤的8箇質粒分彆共轉染COS-1細胞,產生瞭H5N1和H5N2兩箇亞型的基因重排病毒.通過在鷄胚中的連續傳代和適應,2箇重組病毒血凝價上升到1:29、錶麵基因穩定、對6週齡SPF鷄不錶現緻病性,H5N2重組病毒對鷄胚的毒力低于H5N1病毒.這種嘗試證明反嚮遺傳操作技術是研究AIV緻病性和構建疫苗候選株的有用工具.
선택일주아원H5N1아형금류감병독(AIV),결실기HA기인렬해서렬적4개감성안기산、사HA렬해모식유고치병성적PQRERRRKKR↓GL돌변위저치병성적PQRESR↓GL,장수식적HA기인극륭입전록/표체재체pHW2000、구건질립pHW524-HA,장해독주화H9N2아형독주적NA전기인분별극륭입pHW2000,구건질립pHW506-NA화pHW206-NA.장pHW524-HA여pHW506-NA혹pHW206-NA조합、균용A/WSN/33(H1N1)제공6개내부기인,량개조합적8개질립분별공전염COS-1세포,산생료H5N1화H5N2량개아형적기인중배병독.통과재계배중적련속전대화괄응,2개중조병독혈응개상승도1:29、표면기인은정、대6주령SPF계불표현치병성,H5N2중조병독대계배적독력저우H5N1병독.저충상시증명반향유전조작기술시연구AIV치병성화구건역묘후선주적유용공구.
