西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2010年
8期
1-6
,共6页
王志昇%许信刚%童德文%邢福珊%陈曦%唐麒麟%宁蓬勃
王誌昇%許信剛%童德文%邢福珊%陳晞%唐麒麟%寧蓬勃
왕지승%허신강%동덕문%형복산%진희%당기린%저봉발
猪繁殖与呼吸综合征病毒%陕西分离株%ORF5%序列分析%原核表达
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%陝西分離株%ORF5%序列分析%原覈錶達
저번식여호흡종합정병독%협서분리주%ORF5%서렬분석%원핵표체
克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因,并进行序列分析及原核表达.根据GenBank公布的PRRSV ORF5基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株糖基化囊膜蛋白基因 ORF5,将其克隆入 pGEM-T载体中,进行测序及序列分析.再设计另外1对引物扩增 ORF5缺失编码N端31个氨基酸残基的基因片段,将截短的 ORF5基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌 BL21中进行原核表达.结果扩增到603 bp的PRRSV全长 ORF5基因,序列分析表明,分离株与北美型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%.因此推测陕西分离株属于北美型.SDS-PAGE可检测到大小约为38 ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在.Western-blot分析表明,重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别.
剋隆豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV) ORF5基因,併進行序列分析及原覈錶達.根據GenBank公佈的PRRSV ORF5基因的覈苷痠序列,設計併閤成一對特異性引物,用RT-PCR方法擴增PRRSV陝西分離株糖基化囊膜蛋白基因 ORF5,將其剋隆入 pGEM-T載體中,進行測序及序列分析.再設計另外1對引物擴增 ORF5缺失編碼N耑31箇氨基痠殘基的基因片段,將截短的 ORF5基因亞剋隆入原覈錶達載體pET-32a中,在大腸桿菌 BL21中進行原覈錶達.結果擴增到603 bp的PRRSV全長 ORF5基因,序列分析錶明,分離株與北美型代錶株VR-2332和歐洲型代錶株LV氨基痠同源性分彆為87.8%和54.5%.因此推測陝西分離株屬于北美型.SDS-PAGE可檢測到大小約為38 ku的融閤蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在.Western-blot分析錶明,重組蛋白可被PRRSV暘性血清所識彆.
극륭저번식여호흡종합정병독(PRRSV) ORF5기인,병진행서렬분석급원핵표체.근거GenBank공포적PRRSV ORF5기인적핵감산서렬,설계병합성일대특이성인물,용RT-PCR방법확증PRRSV협서분리주당기화낭막단백기인 ORF5,장기극륭입 pGEM-T재체중,진행측서급서렬분석.재설계령외1대인물확증 ORF5결실편마N단31개안기산잔기적기인편단,장절단적 ORF5기인아극륭입원핵표체재체pET-32a중,재대장간균 BL21중진행원핵표체.결과확증도603 bp적PRRSV전장 ORF5기인,서렬분석표명,분리주여북미형대표주VR-2332화구주형대표주LV안기산동원성분별위87.8%화54.5%.인차추측협서분리주속우북미형.SDS-PAGE가검측도대소약위38 ku적융합단백,주요이가용성단백형식존재.Western-blot분석표명,중조단백가피PRRSV양성혈청소식별.
