中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
1期
121-126
,共6页
陈晓清%焦红%程树军%易敏英%刘静宇%许龙岩%刘超
陳曉清%焦紅%程樹軍%易敏英%劉靜宇%許龍巖%劉超
진효청%초홍%정수군%역민영%류정우%허룡암%류초
Caco-2细胞%体外肠道模型%食源性耐药菌%16S rDNA
Caco-2細胞%體外腸道模型%食源性耐藥菌%16S rDNA
Caco-2세포%체외장도모형%식원성내약균%16S rDNA
[目的]构建体外模拟肠道共生系统,用于评价食源性抗菌药及其耐药菌作用于肠道菌群时对人体健康造成的危害风险.[方法]21 d体外培养构建Caco-2细胞三维肠上皮,分成无菌对照组、混合的正常菌群组、沙门菌组、混合菌群-沙门菌组4组,制备混悬液,各组分别单独和混合培养4h,荧光定量PCR法测试共培养前后各菌16SrDNA菌量变化,电阻仪测试跨膜上皮电阻(TEER)数量；免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1变化,评价三维肠上皮屏障功能的改变.[结果]在体外共培养模型内,4种肠道菌混合培养4h后同单独培养组间比较,细菌量增长无统计学差异(P＞0.05))；需氧菌的增长速度明显高于厌氧菌(P＜0.01),厌氧菌:需氧菌浓度比接近100∶1,厌氧菌仍为优势菌.TEER和ZO-1免疫荧光染色结果均提示混合肠道菌群对Caco-2细胞三维肠上皮无明显破坏,侵入性沙门氏菌可显著降低TEER值,并观察到模型的ZO-1结构受到破坏.这种破坏作用在混合肠道菌群加沙门菌群组较轻.[结论]Caco-2细胞三维肠上皮同乳双歧杆菌、植物乳酸杆菌、大肠杆菌和粪肠球菌组成的混合菌群体外共培养能建立稳定的体外肠上皮模型,并具有生物学活性；正常肠道菌群对侵入性沙门菌有拮抗作用.该模型可进一步完善作为食源性抗菌药、耐药菌与肠道系统相互作用研究模型的基础.
[目的]構建體外模擬腸道共生繫統,用于評價食源性抗菌藥及其耐藥菌作用于腸道菌群時對人體健康造成的危害風險.[方法]21 d體外培養構建Caco-2細胞三維腸上皮,分成無菌對照組、混閤的正常菌群組、沙門菌組、混閤菌群-沙門菌組4組,製備混懸液,各組分彆單獨和混閤培養4h,熒光定量PCR法測試共培養前後各菌16SrDNA菌量變化,電阻儀測試跨膜上皮電阻(TEER)數量；免疫熒光染色觀察緊密連接蛋白ZO-1變化,評價三維腸上皮屏障功能的改變.[結果]在體外共培養模型內,4種腸道菌混閤培養4h後同單獨培養組間比較,細菌量增長無統計學差異(P＞0.05))；需氧菌的增長速度明顯高于厭氧菌(P＜0.01),厭氧菌:需氧菌濃度比接近100∶1,厭氧菌仍為優勢菌.TEER和ZO-1免疫熒光染色結果均提示混閤腸道菌群對Caco-2細胞三維腸上皮無明顯破壞,侵入性沙門氏菌可顯著降低TEER值,併觀察到模型的ZO-1結構受到破壞.這種破壞作用在混閤腸道菌群加沙門菌群組較輕.[結論]Caco-2細胞三維腸上皮同乳雙歧桿菌、植物乳痠桿菌、大腸桿菌和糞腸毬菌組成的混閤菌群體外共培養能建立穩定的體外腸上皮模型,併具有生物學活性；正常腸道菌群對侵入性沙門菌有拮抗作用.該模型可進一步完善作為食源性抗菌藥、耐藥菌與腸道繫統相互作用研究模型的基礎.
[목적]구건체외모의장도공생계통,용우평개식원성항균약급기내약균작용우장도균군시대인체건강조성적위해풍험.[방법]21 d체외배양구건Caco-2세포삼유장상피,분성무균대조조、혼합적정상균군조、사문균조、혼합균군-사문균조4조,제비혼현액,각조분별단독화혼합배양4h,형광정량PCR법측시공배양전후각균16SrDNA균량변화,전조의측시과막상피전조(TEER)수량；면역형광염색관찰긴밀련접단백ZO-1변화,평개삼유장상피병장공능적개변.[결과]재체외공배양모형내,4충장도균혼합배양4h후동단독배양조간비교,세균량증장무통계학차이(P＞0.05))；수양균적증장속도명현고우염양균(P＜0.01),염양균:수양균농도비접근100∶1,염양균잉위우세균.TEER화ZO-1면역형광염색결과균제시혼합장도균군대Caco-2세포삼유장상피무명현파배,침입성사문씨균가현저강저TEER치,병관찰도모형적ZO-1결구수도파배.저충파배작용재혼합장도균군가사문균군조교경.[결론]Caco-2세포삼유장상피동유쌍기간균、식물유산간균、대장간균화분장구균조성적혼합균군체외공배양능건립은정적체외장상피모형,병구유생물학활성；정상장도균군대침입성사문균유길항작용.해모형가진일보완선작위식원성항균약、내약균여장도계통상호작용연구모형적기출.
