分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2012年
4期
485-489
,共5页
齐飞艳%陈媛文%张颖%张春玲%高健
齊飛豔%陳媛文%張穎%張春玲%高健
제비염%진원문%장영%장춘령%고건
毛竹(Phyllostachys edulis)%EMF2%正交设计%原核表达%诱导蛋白
毛竹(Phyllostachys edulis)%EMF2%正交設計%原覈錶達%誘導蛋白
모죽(Phyllostachys edulis)%EMF2%정교설계%원핵표체%유도단백
在对毛竹EMF2基因功能研究的过程中,需要制备其抗体用于蛋白表达的检测.由于PheEMF2原核表达量低,纯化到的蛋白量不利于抗体制备,所以本研究用正交设计的方法对PheEMF2原核表达诱导条件进行优化,提高其原核蛋白表达量.根据L25(56)正交设计表设计诱导时间、诱导温度、IPTG终浓度、菌液OD值四因素五水平的融合蛋白表达诱导条件.用凝胶图像光密度分析系统分析各诱导条件下融合蛋白的表达量,发现菌液OD值和诱导温度对蛋白表达量有显著影响,而IPTG终浓度和诱导时间对蛋白表达量影响不显著.根据正交设计的效应曲线和方差分析结果,选择在菌株生长值OD600为1.1时,加入IPTG至终浓度1.0 mmol/L,放入25℃摇床中振荡8h诱导融合蛋白表达,融合蛋白的表达量约提升了10倍,占细菌总蛋白量的21.4％.
在對毛竹EMF2基因功能研究的過程中,需要製備其抗體用于蛋白錶達的檢測.由于PheEMF2原覈錶達量低,純化到的蛋白量不利于抗體製備,所以本研究用正交設計的方法對PheEMF2原覈錶達誘導條件進行優化,提高其原覈蛋白錶達量.根據L25(56)正交設計錶設計誘導時間、誘導溫度、IPTG終濃度、菌液OD值四因素五水平的融閤蛋白錶達誘導條件.用凝膠圖像光密度分析繫統分析各誘導條件下融閤蛋白的錶達量,髮現菌液OD值和誘導溫度對蛋白錶達量有顯著影響,而IPTG終濃度和誘導時間對蛋白錶達量影響不顯著.根據正交設計的效應麯線和方差分析結果,選擇在菌株生長值OD600為1.1時,加入IPTG至終濃度1.0 mmol/L,放入25℃搖床中振盪8h誘導融閤蛋白錶達,融閤蛋白的錶達量約提升瞭10倍,佔細菌總蛋白量的21.4％.
재대모죽EMF2기인공능연구적과정중,수요제비기항체용우단백표체적검측.유우PheEMF2원핵표체량저,순화도적단백량불리우항체제비,소이본연구용정교설계적방법대PheEMF2원핵표체유도조건진행우화,제고기원핵단백표체량.근거L25(56)정교설계표설계유도시간、유도온도、IPTG종농도、균액OD치사인소오수평적융합단백표체유도조건.용응효도상광밀도분석계통분석각유도조건하융합단백적표체량,발현균액OD치화유도온도대단백표체량유현저영향,이IPTG종농도화유도시간대단백표체량영향불현저.근거정교설계적효응곡선화방차분석결과,선택재균주생장치OD600위1.1시,가입IPTG지종농도1.0 mmol/L,방입25℃요상중진탕8h유도융합단백표체,융합단백적표체량약제승료10배,점세균총단백량적21.4％.
