CAJ | 학술논문

从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDV HK'1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3'PCR片段和5'PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体.利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5'PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3'PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK'1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定.结果表明,HK'1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5'NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3'NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾.在HK'1/70株全长cDNA序列的5'端引入了T7启动子序列,在poly A 3'端引入了Psp1406Ⅰ识别序列.通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK'1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系最近,且位于CB5遗传进化树的分支上.HK'1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础.
종실험감염저수포병병독(SVDV)적유서조직중제취RNA,이용장거리적RACE기술,확증출복개SVDV HK'1/70주전기인조적2개충실성적cDNA중첩편단(3'PCR편단화5'PCR편단),분별극륭진pGEM-T Easy재체.이용AatⅡ화BssHⅡ매절함5'PCR편단적중조질립,회수목적편단,정향극륭우함3'PCR편단적중조질립,구건출료SVDV HK'1/70주전장cDNA중조질립,연후진행서렬측정.결과표명,HK'1/70주기인조전기인조서렬장7 401 nt(poly A제외),기중5'NCR장743 nt,해독주단백편마구적핵감산서렬위6 558 nt,편마일개장2 185개안기산적취합단백,3'NCR장102 nt,기후시지소함유74개A감기적poly A미.재HK'1/70주전장cDNA서렬적5'단인입료T7계동자서렬,재poly A 3'단인입료Psp1406Ⅰ식별서렬.통과서렬동원성화진화수분석,결과표명,HK'1/70속우제Ⅱ항원유전군,SVDV여CB5적유전관계최근,차위우CB5유전진화수적분지상.HK'1/70주전장cDNA적서렬측정급구건,위증구SVDV화재분자수평진일보심입연구SVDV타하견실적기출.