中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
20期
3968-3971
,共4页
罗伟琼%刘建华%张祥忠%陈嘉榆%陈运贤
囉偉瓊%劉建華%張祥忠%陳嘉榆%陳運賢
라위경%류건화%장상충%진가유%진운현
骨髓间质干细胞%碱性成纤维细胞生长因子%转化生长因子β1%细胞分化%大鼠
骨髓間質榦細胞%堿性成纖維細胞生長因子%轉化生長因子β1%細胞分化%大鼠
골수간질간세포%감성성섬유세포생장인자%전화생장인자β1%세포분화%대서
目的:对比观察碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用.方法:实验于2005-12/2006-07在中山大学干细胞与组织工程中心实验室进行.实验材料:清洁级大鼠由中山大学实验动物中心提供(SCXR(粤)2004-0011,粤监证字2004A089),三四周,大约50 g.实验方法:①分离培养大鼠骨髓间质干细胞,并采用流式细胞仪鉴定.②取第3代骨髓间质干细胞,以1×107L-1接种于24孔培养板和六孔板中,24 h后换液并分组:对照组:仅仅更换培养液;5-氮胞苷诱导组:10μmol/L 5-氮胞苷孵育24 h后更换新鲜培养液;5-氮胞苷+碱性成纤维生长因子诱导组:10μmol/L 5-氮胞苷孵育24 h后更换含10μg/L碱性成纤维生长因子的新鲜培养液;5-氮胞苷+转化生长因子β1诱导组:10μmol/L 5-氮胞苷孵育24 h后更换含10μg/L转化生长因子β1的新鲜培养液.以后每3 d换液1次,前2组换完全培养基,后2组分别换含10μg/L碱性成纤维生长因子和10μg/L转化生长因子β1的完全培养基.③30 d后应用RT-PCR法检测心肌细胞转录因子GATA-4、结蛋白表达,免疫细胞化学染色法检测细胞心肌肌钙蛋白,并在倒置显微镜下观察细胞跳动情况.结果:①骨髓间质干细胞的生长特性及鉴定:原代培养大鼠骨髓质干细胞3 d后镜下可见有细胞贴壁,形成克隆,七八天长满,随着换液和传代,细胞逐渐纯化,第3代细胞形成均一的长梭形,流式细胞仪检测发现CD44、CD29表达阳性,CD45、CD11b表达阴性.②骨髓间质干细胞向心肌细胞的分化:大鼠骨髓间质干细胞经5-氮胞苷、5-氮胞苷+碱性成纤维生长因子或5-氮胞苷+转化生长因子β1诱导30 d后,有部分细胞心肌肌钙蛋白表达阳性,GATA-4和结蛋白表达明显增强.镜下观察5-氮胞苷+碱性成纤维生长因子诱导组所诱导细胞变细、胞体伸长,呈心肌样细胞跳动,并较其他两组明显,心肌肌钙蛋白阳性细胞的比率较高(P＜0.05).结论:碱性成纤维生长因子在体外有协同5-氮胞苷促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用,而转化生长因子β1无此作用.
目的:對比觀察堿性成纖維細胞生長因子和轉化生長因子β1促進大鼠骨髓間質榦細胞分化為心肌細胞的作用.方法:實驗于2005-12/2006-07在中山大學榦細胞與組織工程中心實驗室進行.實驗材料:清潔級大鼠由中山大學實驗動物中心提供(SCXR(粵)2004-0011,粵鑑證字2004A089),三四週,大約50 g.實驗方法:①分離培養大鼠骨髓間質榦細胞,併採用流式細胞儀鑒定.②取第3代骨髓間質榦細胞,以1×107L-1接種于24孔培養闆和六孔闆中,24 h後換液併分組:對照組:僅僅更換培養液;5-氮胞苷誘導組:10μmol/L 5-氮胞苷孵育24 h後更換新鮮培養液;5-氮胞苷+堿性成纖維生長因子誘導組:10μmol/L 5-氮胞苷孵育24 h後更換含10μg/L堿性成纖維生長因子的新鮮培養液;5-氮胞苷+轉化生長因子β1誘導組:10μmol/L 5-氮胞苷孵育24 h後更換含10μg/L轉化生長因子β1的新鮮培養液.以後每3 d換液1次,前2組換完全培養基,後2組分彆換含10μg/L堿性成纖維生長因子和10μg/L轉化生長因子β1的完全培養基.③30 d後應用RT-PCR法檢測心肌細胞轉錄因子GATA-4、結蛋白錶達,免疫細胞化學染色法檢測細胞心肌肌鈣蛋白,併在倒置顯微鏡下觀察細胞跳動情況.結果:①骨髓間質榦細胞的生長特性及鑒定:原代培養大鼠骨髓質榦細胞3 d後鏡下可見有細胞貼壁,形成剋隆,七八天長滿,隨著換液和傳代,細胞逐漸純化,第3代細胞形成均一的長梭形,流式細胞儀檢測髮現CD44、CD29錶達暘性,CD45、CD11b錶達陰性.②骨髓間質榦細胞嚮心肌細胞的分化:大鼠骨髓間質榦細胞經5-氮胞苷、5-氮胞苷+堿性成纖維生長因子或5-氮胞苷+轉化生長因子β1誘導30 d後,有部分細胞心肌肌鈣蛋白錶達暘性,GATA-4和結蛋白錶達明顯增彊.鏡下觀察5-氮胞苷+堿性成纖維生長因子誘導組所誘導細胞變細、胞體伸長,呈心肌樣細胞跳動,併較其他兩組明顯,心肌肌鈣蛋白暘性細胞的比率較高(P＜0.05).結論:堿性成纖維生長因子在體外有協同5-氮胞苷促進大鼠骨髓間質榦細胞分化為心肌細胞的作用,而轉化生長因子β1無此作用.
목적:대비관찰감성성섬유세포생장인자화전화생장인자β1촉진대서골수간질간세포분화위심기세포적작용.방법:실험우2005-12/2006-07재중산대학간세포여조직공정중심실험실진행.실험재료:청길급대서유중산대학실험동물중심제공(SCXR(월)2004-0011,월감증자2004A089),삼사주,대약50 g.실험방법:①분리배양대서골수간질간세포,병채용류식세포의감정.②취제3대골수간질간세포,이1×107L-1접충우24공배양판화륙공판중,24 h후환액병분조:대조조:부부경환배양액;5-담포감유도조:10μmol/L 5-담포감부육24 h후경환신선배양액;5-담포감+감성성섬유생장인자유도조:10μmol/L 5-담포감부육24 h후경환함10μg/L감성성섬유생장인자적신선배양액;5-담포감+전화생장인자β1유도조:10μmol/L 5-담포감부육24 h후경환함10μg/L전화생장인자β1적신선배양액.이후매3 d환액1차,전2조환완전배양기,후2조분별환함10μg/L감성성섬유생장인자화10μg/L전화생장인자β1적완전배양기.③30 d후응용RT-PCR법검측심기세포전록인자GATA-4、결단백표체,면역세포화학염색법검측세포심기기개단백,병재도치현미경하관찰세포도동정황.결과:①골수간질간세포적생장특성급감정:원대배양대서골수질간세포3 d후경하가견유세포첩벽,형성극륭,칠팔천장만,수착환액화전대,세포축점순화,제3대세포형성균일적장사형,류식세포의검측발현CD44、CD29표체양성,CD45、CD11b표체음성.②골수간질간세포향심기세포적분화:대서골수간질간세포경5-담포감、5-담포감+감성성섬유생장인자혹5-담포감+전화생장인자β1유도30 d후,유부분세포심기기개단백표체양성,GATA-4화결단백표체명현증강.경하관찰5-담포감+감성성섬유생장인자유도조소유도세포변세、포체신장,정심기양세포도동,병교기타량조명현,심기기개단백양성세포적비솔교고(P＜0.05).결론:감성성섬유생장인자재체외유협동5-담포감촉진대서골수간질간세포분화위심기세포적작용,이전화생장인자β1무차작용.
