曲阜师范大学学报（自然科学版）
麯阜師範大學學報（自然科學版）
곡부사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF QUFU NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION)
2007年
3期
100-104
,共5页
艾鹏慧%孙淑斌%胡江%徐国华
艾鵬慧%孫淑斌%鬍江%徐國華
애붕혜%손숙빈%호강%서국화
磷转运蛋白%水稻%植物表达载体%再生%GUS基因%瞬时表达
燐轉運蛋白%水稻%植物錶達載體%再生%GUS基因%瞬時錶達
린전운단백%수도%식물표체재체%재생%GUS기인%순시표체
通过PCR从粳稻(Oryza sativa L.cv.ssp.Japonica)的总DNA中扩增出一个磷转运蛋白基因(Phosphates transporter 1;6;OsPht1;6,accession no AF536966)的启动子序列.以此为基础与二元表达载体PS1aG-3构建含Pht1;6 启动子的植物表达载体,并通过根癌农杆菌介导转化了水稻武运粳7号品种.同时,对其愈伤组织高效再生体系和影响报告基因GUS瞬时表达的各种因素也做了比较研究.结果表明: ①诱导水稻武运粳7号品种愈伤形成,3 mg/L 2,4-D的生长素浓度最适宜;② GUS基因高瞬时表达频率的条件为: 工程菌液的浓度OD600值为 0.7-0.8,浸染时间30 min,共培养时间3 d.利用这些再生转化条件,以EHA105为菌株转化浸染愈伤组织,获得了较高频率的Pht1;6 启动子驱动的GUS基因瞬时表达.这些方法都有效地提高了抗性愈伤组织的形成率,该实验获得了转基因植株,经PCR检测,证实已将目的基因整合到水稻的基因组中.
通過PCR從粳稻(Oryza sativa L.cv.ssp.Japonica)的總DNA中擴增齣一箇燐轉運蛋白基因(Phosphates transporter 1;6;OsPht1;6,accession no AF536966)的啟動子序列.以此為基礎與二元錶達載體PS1aG-3構建含Pht1;6 啟動子的植物錶達載體,併通過根癌農桿菌介導轉化瞭水稻武運粳7號品種.同時,對其愈傷組織高效再生體繫和影響報告基因GUS瞬時錶達的各種因素也做瞭比較研究.結果錶明: ①誘導水稻武運粳7號品種愈傷形成,3 mg/L 2,4-D的生長素濃度最適宜;② GUS基因高瞬時錶達頻率的條件為: 工程菌液的濃度OD600值為 0.7-0.8,浸染時間30 min,共培養時間3 d.利用這些再生轉化條件,以EHA105為菌株轉化浸染愈傷組織,穫得瞭較高頻率的Pht1;6 啟動子驅動的GUS基因瞬時錶達.這些方法都有效地提高瞭抗性愈傷組織的形成率,該實驗穫得瞭轉基因植株,經PCR檢測,證實已將目的基因整閤到水稻的基因組中.
통과PCR종갱도(Oryza sativa L.cv.ssp.Japonica)적총DNA중확증출일개린전운단백기인(Phosphates transporter 1;6;OsPht1;6,accession no AF536966)적계동자서렬.이차위기출여이원표체재체PS1aG-3구건함Pht1;6 계동자적식물표체재체,병통과근암농간균개도전화료수도무운갱7호품충.동시,대기유상조직고효재생체계화영향보고기인GUS순시표체적각충인소야주료비교연구.결과표명: ①유도수도무운갱7호품충유상형성,3 mg/L 2,4-D적생장소농도최괄의;② GUS기인고순시표체빈솔적조건위: 공정균액적농도OD600치위 0.7-0.8,침염시간30 min,공배양시간3 d.이용저사재생전화조건,이EHA105위균주전화침염유상조직,획득료교고빈솔적Pht1;6 계동자구동적GUS기인순시표체.저사방법도유효지제고료항성유상조직적형성솔,해실험획득료전기인식주,경PCR검측,증실이장목적기인정합도수도적기인조중.
