CAJ | 학술논문

目的探讨真菌提取物JN219的抗病毒机制.方法 (1)样品对病毒入侵宿主细胞的抑制作用:将样品(JN219 50μg/ml、柱洗脱组分5 g/L)分别与人巨细胞病毒(HCMV半数组织感染量TCID50为105/ml)等容量混合,不同时间(混合后立刻、混合后37℃作用1 h)以不同稀释度、100μl/孔接种至多孔板人胚肺细胞(HEL)上;(2)样品对病毒复制的抑制作用:将HCMV(100个TCID50)100μl/孔接种于HEL上1 h后,加不同稀释度的样品;(3)灭活病毒对样品抗病毒作用的抑制作用:将紫外线灭活的HCMV与JN219、柱洗脱组分等容量混合,37℃作用1 h,加等容量HCMV(TCID50为105/ml)混合37℃作用1 h,以不同稀释度、100μl孔接种于96孔板内的HEL上.以上各实验组同时设细胞对照组、病毒对照组、空白对照组、相应稀释度的样品对照组,37℃、5%CO2培养,每日观察细胞CPE,当病毒对照病变90%以上,终止培养,中性红染色,在540 nm读取吸光度A值,用Reed-Muench法计算细胞半数有效浓度(IC50)和病毒TCID50.通过比较组间差异,探讨在哪一复制周期样品对病毒产生抑制作用.结果 (1)样品对病毒入侵宿主细胞的抑制作用:JN219、柱洗脱组分与HCMV等容量混合后立刻接种细胞,测得病毒TICD50为104.8/ml,与病毒对照组比较(TCID50为105/ml)差异无显著性;与病毒作用1 h后接种细胞,JN219、柱洗脱组分IC50分别为0.168μg/ml、0.185μg/ml,第一孔JN219 TCID50为101.6/ml,柱洗脱组分标本未测得病毒,可使HCMV得到抑制;(2)样品对病毒复制的抑制作用:先将病毒接种细胞1 h,然后加JN219、柱洗脱组分,IC50分别为3.29μg/ml、13.1 g/L,样品不能完全抑制人巨细胞病毒病变的发生;(3)灭活病毒对样品抗病毒作用的抑制作用:紫外线灭活的病毒与样品作用1 h,再加等容量病毒后接种细胞,样品JN219、柱洗脱组分与病毒混合物TCID50分别为103.5、103.75,样品抗病毒位点已被紫外线灭活病毒外膜蛋白占据,抗病毒效果降低.结论 JN219抗人巨细胞病毒作用机制主要是阻断病毒入侵宿主细胞,作用位点主要为人巨细胞病毒外膜蛋白. 目的探討真菌提取物JN219的抗病毒機製.方法 (1)樣品對病毒入侵宿主細胞的抑製作用:將樣品(JN219 50μg/ml、柱洗脫組分5 g/L)分彆與人巨細胞病毒(HCMV半數組織感染量TCID50為105/ml)等容量混閤,不同時間(混閤後立刻、混閤後37℃作用1 h)以不同稀釋度、100μl/孔接種至多孔闆人胚肺細胞(HEL)上;(2)樣品對病毒複製的抑製作用:將HCMV(100箇TCID50)100μl/孔接種于HEL上1 h後,加不同稀釋度的樣品;(3)滅活病毒對樣品抗病毒作用的抑製作用:將紫外線滅活的HCMV與JN219、柱洗脫組分等容量混閤,37℃作用1 h,加等容量HCMV(TCID50為105/ml)混閤37℃作用1 h,以不同稀釋度、100μl孔接種于96孔闆內的HEL上.以上各實驗組同時設細胞對照組、病毒對照組、空白對照組、相應稀釋度的樣品對照組,37℃、5%CO2培養,每日觀察細胞CPE,噹病毒對照病變90%以上,終止培養,中性紅染色,在540 nm讀取吸光度A值,用Reed-Muench法計算細胞半數有效濃度(IC50)和病毒TCID50.通過比較組間差異,探討在哪一複製週期樣品對病毒產生抑製作用.結果 (1)樣品對病毒入侵宿主細胞的抑製作用:JN219、柱洗脫組分與HCMV等容量混閤後立刻接種細胞,測得病毒TICD50為104.8/ml,與病毒對照組比較(TCID50為105/ml)差異無顯著性;與病毒作用1 h後接種細胞,JN219、柱洗脫組分IC50分彆為0.168μg/ml、0.185μg/ml,第一孔JN219 TCID50為101.6/ml,柱洗脫組分標本未測得病毒,可使HCMV得到抑製;(2)樣品對病毒複製的抑製作用:先將病毒接種細胞1 h,然後加JN219、柱洗脫組分,IC50分彆為3.29μg/ml、13.1 g/L,樣品不能完全抑製人巨細胞病毒病變的髮生;(3)滅活病毒對樣品抗病毒作用的抑製作用:紫外線滅活的病毒與樣品作用1 h,再加等容量病毒後接種細胞,樣品JN219、柱洗脫組分與病毒混閤物TCID50分彆為103.5、103.75,樣品抗病毒位點已被紫外線滅活病毒外膜蛋白佔據,抗病毒效果降低.結論 JN219抗人巨細胞病毒作用機製主要是阻斷病毒入侵宿主細胞,作用位點主要為人巨細胞病毒外膜蛋白.
목적 탐토진균제취물JN219적항병독궤제.방법 (1)양품대병독입침숙주세포적억제작용:장양품(JN219 50μg/ml、주세탈조분5 g/L)분별여인거세포병독(HCMV반수조직감염량TCID50위105/ml)등용량혼합,불동시간(혼합후립각、혼합후37℃작용1 h)이불동희석도、100μl/공접충지다공판인배폐세포(HEL)상;(2)양품대병독복제적억제작용:장HCMV(100개TCID50)100μl/공접충우HEL상1 h후,가불동희석도적양품;(3)멸활병독대양품항병독작용적억제작용:장자외선멸활적HCMV여JN219、주세탈조분등용량혼합,37℃작용1 h,가등용량HCMV(TCID50위105/ml)혼합37℃작용1 h,이불동희석도、100μl공접충우96공판내적HEL상.이상각실험조동시설세포대조조、병독대조조、공백대조조、상응희석도적양품대조조,37℃、5%CO2배양,매일관찰세포CPE,당병독대조병변90%이상,종지배양,중성홍염색,재540 nm독취흡광도A치,용Reed-Muench법계산세포반수유효농도(IC50)화병독TCID50.통과비교조간차이,탐토재나일복제주기양품대병독산생억제작용.결과 (1)양품대병독입침숙주세포적억제작용:JN219、주세탈조분여HCMV등용량혼합후립각접충세포,측득병독TICD50위104.8/ml,여병독대조조비교(TCID50위105/ml)차이무현저성;여병독작용1 h후접충세포,JN219、주세탈조분IC50분별위0.168μg/ml、0.185μg/ml,제일공JN219 TCID50위101.6/ml,주세탈조분표본미측득병독,가사HCMV득도억제;(2)양품대병독복제적억제작용:선장병독접충세포1 h,연후가JN219、주세탈조분,IC50분별위3.29μg/ml、13.1 g/L,양품불능완전억제인거세포병독병변적발생;(3)멸활병독대양품항병독작용적억제작용:자외선멸활적병독여양품작용1 h,재가등용량병독후접충세포,양품JN219、주세탈조분여병독혼합물TCID50분별위103.5、103.75,양품항병독위점이피자외선멸활병독외막단백점거,항병독효과강저.결론 JN219항인거세포병독작용궤제주요시조단병독입침숙주세포,작용위점주요위인거세포병독외막단백.