世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2009年
5期
454-458
,共5页
胡传翠%张锦前%王琦%李国力%李朝品%成军
鬍傳翠%張錦前%王琦%李國力%李朝品%成軍
호전취%장금전%왕기%리국력%리조품%성군
非结构蛋白3%丙型肝炎病毒%人胰腺cDNA文库%酵母双杂交
非結構蛋白3%丙型肝炎病毒%人胰腺cDNA文庫%酵母雙雜交
비결구단백3%병형간염병독%인이선cDNA문고%효모쌍잡교
目的:应用酵母双杂交技术筛选人胰腺cDNA文库中与HCV 1b亚型非结构蛋白NS3相互作用的结合蛋白的编码基因, 为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定实验基础.方法:扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定, 纯化后的文库质粒转化酵母菌Y187; 构建诱饵质粒PGBKT7-NS3并转化酵母菌AH109, 在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合, 在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选, 提取蓝色酵母菌落质粒, 电转化大肠埃希菌DH5α后提取质粒测序,对测序结果进行序列比对和分析.结果:成功构建人胰腺cDNA文库和pGBKT7-NS3重组质粒; 将pGBKT7-NS3质粒转化AH109酵母菌株后, 并从人胰腺cDNA文库中筛选出11种与HCV NS3蛋白相结合的蛋白基因.结论:筛选出的与HCV NS3蛋白结合的胰腺蛋白基因中, 部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.
目的:應用酵母雙雜交技術篩選人胰腺cDNA文庫中與HCV 1b亞型非結構蛋白NS3相互作用的結閤蛋白的編碼基因, 為進一步研究HCV影響糖、脂代謝機製奠定實驗基礎.方法:擴增人胰腺cDNA文庫併純化鑒定, 純化後的文庫質粒轉化酵母菌Y187; 構建誘餌質粒PGBKT7-NS3併轉化酵母菌AH109, 在色氨痠缺陷型培養基(SD/-Trp)上篩選暘性菌落.應用酵母雙雜交繫統3將暘性重組AH109菌株與重組酵母菌株Y187進行配閤, 在四缺培養基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和鋪有X-α-gal的四缺培養基上進行篩選, 提取藍色酵母菌落質粒, 電轉化大腸埃希菌DH5α後提取質粒測序,對測序結果進行序列比對和分析.結果:成功構建人胰腺cDNA文庫和pGBKT7-NS3重組質粒; 將pGBKT7-NS3質粒轉化AH109酵母菌株後, 併從人胰腺cDNA文庫中篩選齣11種與HCV NS3蛋白相結閤的蛋白基因.結論:篩選齣的與HCV NS3蛋白結閤的胰腺蛋白基因中, 部分與2型糖尿病、肝髒脂肪變性密切相關.
목적:응용효모쌍잡교기술사선인이선cDNA문고중여HCV 1b아형비결구단백NS3상호작용적결합단백적편마기인, 위진일보연구HCV영향당、지대사궤제전정실험기출.방법:확증인이선cDNA문고병순화감정, 순화후적문고질립전화효모균Y187; 구건유이질립PGBKT7-NS3병전화효모균AH109, 재색안산결함형배양기(SD/-Trp)상사선양성균락.응용효모쌍잡교계통3장양성중조AH109균주여중조효모균주Y187진행배합, 재사결배양기(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)화포유X-α-gal적사결배양기상진행사선, 제취람색효모균락질립, 전전화대장애희균DH5α후제취질립측서,대측서결과진행서렬비대화분석.결과:성공구건인이선cDNA문고화pGBKT7-NS3중조질립; 장pGBKT7-NS3질립전화AH109효모균주후, 병종인이선cDNA문고중사선출11충여HCV NS3단백상결합적단백기인.결론:사선출적여HCV NS3단백결합적이선단백기인중, 부분여2형당뇨병、간장지방변성밀절상관.
