医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2009年
3期
239-242
,共4页
杨莹珠%王琪%周怡%张玮%黎丹戎%唐步坚%李力
楊瑩珠%王琪%週怡%張瑋%黎丹戎%唐步堅%李力
양형주%왕기%주이%장위%려단융%당보견%리력
趋化因子配体18%卵巢癌%原核表达%蛋白纯化
趨化因子配體18%卵巢癌%原覈錶達%蛋白純化
추화인자배체18%란소암%원핵표체%단백순화
目的 构建PET SUMO-CCL18原核表达质粒,并表达、纯化获得重组趋化因子配体18成熟肽段.方法 从人卵巢癌组织中克隆CCL18基因全长,继而扩增表达成熟蛋白质的核酸序列,连接入PET SUMO载体,重组阳性克隆转入感受态细胞BL21(DE3)中IPTG诱导表达,基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)验证后以SUMO蛋白酶切除载体部分,纯化浓缩,MALDI-TOF鉴定表达结果.结果 测序分析证实,克隆入PET SUMO载体的CCL18序列与Genbank中报道序列完全一致,纯化后蛋白质谱鉴定与天然CCL18成熟蛋白序列一致.结论 成功构建了高表达CCL18蛋白的表达系统,得到重组CCL18成熟肽段,为进一步研究CCL18蛋白在卵巢癌中的作用提供实验基础.
目的 構建PET SUMO-CCL18原覈錶達質粒,併錶達、純化穫得重組趨化因子配體18成熟肽段.方法 從人卵巢癌組織中剋隆CCL18基因全長,繼而擴增錶達成熟蛋白質的覈痠序列,連接入PET SUMO載體,重組暘性剋隆轉入感受態細胞BL21(DE3)中IPTG誘導錶達,基質輔助激光解吸/電離質譜技術(MALDI-TOF)驗證後以SUMO蛋白酶切除載體部分,純化濃縮,MALDI-TOF鑒定錶達結果.結果 測序分析證實,剋隆入PET SUMO載體的CCL18序列與Genbank中報道序列完全一緻,純化後蛋白質譜鑒定與天然CCL18成熟蛋白序列一緻.結論 成功構建瞭高錶達CCL18蛋白的錶達繫統,得到重組CCL18成熟肽段,為進一步研究CCL18蛋白在卵巢癌中的作用提供實驗基礎.
목적 구건PET SUMO-CCL18원핵표체질립,병표체、순화획득중조추화인자배체18성숙태단.방법 종인란소암조직중극륭CCL18기인전장,계이확증표체성숙단백질적핵산서렬,련접입PET SUMO재체,중조양성극륭전입감수태세포BL21(DE3)중IPTG유도표체,기질보조격광해흡/전리질보기술(MALDI-TOF)험증후이SUMO단백매절제재체부분,순화농축,MALDI-TOF감정표체결과.결과 측서분석증실,극륭입PET SUMO재체적CCL18서렬여Genbank중보도서렬완전일치,순화후단백질보감정여천연CCL18성숙단백서렬일치.결론 성공구건료고표체CCL18단백적표체계통,득도중조CCL18성숙태단,위진일보연구CCL18단백재란소암중적작용제공실험기출.
