新疆农业大学学报
新疆農業大學學報
신강농업대학학보
JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
1期
47-52
,共6页
陈胜男%马素贞%陶玉成%申卫红%刘腾飞%简子健
陳勝男%馬素貞%陶玉成%申衛紅%劉騰飛%簡子健
진성남%마소정%도옥성%신위홍%류등비%간자건
犬细小病毒%VP2基因%克隆%原核表达%反应原性
犬細小病毒%VP2基因%剋隆%原覈錶達%反應原性
견세소병독%VP2기인%극륭%원핵표체%반응원성
根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增.把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定.将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达.结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%.系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致.Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性.
根據基因庫已髮錶犬細小病毒序列設計閤成瞭VP2基因的1對特異引物,以細小病毒感染的犬糞樣品中提取的總DNA為模闆,進行PCR擴增.把擴增產物剋隆至pMD18-T載體進行測序、鑒定.將剋隆的VP2基因片段剋隆至原覈錶達載體pGEX-4T-2,再將構建成功的原覈錶達質粒載體pGEX-4T-2-VP2轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中,進行鑒定、測序、錶達.結果錶明,剋隆的VP2基因片段全長1 755 bp,與13箇VP2基因序列的同源性為98.4%～99.8%.繫統進化樹分析錶明,所剋隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的進化途徑一緻.Western-blotting分析顯示,錶達產物為90 kD的融閤蛋白,可被犬細小病毒暘性血清所識彆,具有良好的反應原性.
근거기인고이발표견세소병독서렬설계합성료VP2기인적1대특이인물,이세소병독감염적견분양품중제취적총DNA위모판,진행PCR확증.파확증산물극륭지pMD18-T재체진행측서、감정.장극륭적VP2기인편단극륭지원핵표체재체pGEX-4T-2,재장구건성공적원핵표체질립재체pGEX-4T-2-VP2전화지대장간균BL21(DE3)중,진행감정、측서、표체.결과표명,극륭적VP2기인편단전장1 755 bp,여13개VP2기인서렬적동원성위98.4%～99.8%.계통진화수분석표명,소극륭적VP2 CSN830611서렬동일본주(AB054222)、의대리주(AF306445)적진화도경일치.Western-blotting분석현시,표체산물위90 kD적융합단백,가피견세소병독양성혈청소식별,구유량호적반응원성.
