CAJ | 학술논문

本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡ-Ii复合物聚合中的作用特征.用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFP-C1载体中,构建含Ii-GFP融合基因的真核表达载体.同时还分别构建了含pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡa和pEGFP-N1-MHCⅡβ真核表达载体.用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS-7细胞,培养48 h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系.结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象.免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡa或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均能检测到MHCⅡa-li、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均检测不到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物.因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡ-Ii复合体的形成是至关重要的.
본연구지재탐명계항정련과막구특정안기산재형성MHCⅡ-Ii복합물취합중적작용특정.용대인물PCR정점돌변법장계Ii련과막구2개안기산Gln47화Thr50분별돌변위병안산(Ala),재련접도pEGFP-C1재체중,구건함Ii-GFP융합기인적진핵표체재체.동시환분별구건료함pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡa화pEGFP-N1-MHCⅡβ진핵표체재체.용지질체개도법장저사중조질립단독혹공전염지COS-7세포,배양48 h후경형광현미경검측야생형Ii화돌변형Ii여MHCⅡ류분자적세포정위,병통과면역공침정연구타문지간적상호관계.결과현시,야생형Ii련여MHCⅡα혹MHCⅡβ지간존재세포내적공정위,이돌변형Ii여MHCⅡα혹MHCⅡβ재세포중공표체후미출현공정위현상.면역공침정결과현시,재야생형Ii련여MHCⅡa혹(화)MHCⅡβ단전염혹삼자공전염COS-7세포후,균능검측도MHCⅡa-li、MHCⅡβ-Ii화MHCⅡ-Ii복합물,이돌변형Ii련여MHCⅡα혹(화)MHCⅡβ단전염혹삼자공전염COS-7세포후,균검측불도MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii화MHCⅡ-Ii복합물.인차Ii련과막구Gln47화Thr50 2개안기산대우MHCⅡ-Ii복합체적형성시지관중요적.