医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
4期
327-333
,共7页
张彦青%黄健%张群%钟文%胥文春%王虹%张雪梅
張彥青%黃健%張群%鐘文%胥文春%王虹%張雪梅
장언청%황건%장군%종문%서문춘%왕홍%장설매
肺炎链球菌%单一突变%生长%毒力
肺炎鏈毬菌%單一突變%生長%毒力
폐염련구균%단일돌변%생장%독력
目的 鉴定基因spd-ABC、spd-1672、spd-1673和长间隔序列spd-J在肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)毒力中的作用.方法 采用长臂同源聚合酶链反应(LFH-PCR)的方法分别构建这4个序列的红霉素抗性基因(erm)替代缺失突变体,通过PCR和测序鉴定是否构建成功;通过绘制生长曲线观察基因对细菌生长繁殖的影响,通过小鼠毒力实验观察基因对细菌致病性的影响.结果 所构建缺陷菌目的 基因由erm基因完全替代;spd-ABC、spd-1673和长间隔序列spd-J 3个片段缺陷菌的生长趋势与野生菌没有明显差异,生长大约5 h A值均可达到峰值,而spd-1672缺陷菌出现明显的延迟现象,生长8 h后其A值才达到最高值;野生菌与缺失spd-ABC、spd-1673和长间隔序列spd-J的缺陷菌感染小鼠各组半数死亡时间分别为19、22、24和24 h,差异无统计学意义,而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半数死亡时间在75 h左右,显著长于野生菌感染小鼠组(P＜0.05).结论 在构建的4个单个基因缺失突变体中,spd-1672缺陷后S.pn生长明显延迟,毒力显著下降,提示spd-1672是S.pn的一个新的毒力因子.
目的 鑒定基因spd-ABC、spd-1672、spd-1673和長間隔序列spd-J在肺炎鏈毬菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)毒力中的作用.方法 採用長臂同源聚閤酶鏈反應(LFH-PCR)的方法分彆構建這4箇序列的紅黴素抗性基因(erm)替代缺失突變體,通過PCR和測序鑒定是否構建成功;通過繪製生長麯線觀察基因對細菌生長繁殖的影響,通過小鼠毒力實驗觀察基因對細菌緻病性的影響.結果 所構建缺陷菌目的 基因由erm基因完全替代;spd-ABC、spd-1673和長間隔序列spd-J 3箇片段缺陷菌的生長趨勢與野生菌沒有明顯差異,生長大約5 h A值均可達到峰值,而spd-1672缺陷菌齣現明顯的延遲現象,生長8 h後其A值纔達到最高值;野生菌與缺失spd-ABC、spd-1673和長間隔序列spd-J的缺陷菌感染小鼠各組半數死亡時間分彆為19、22、24和24 h,差異無統計學意義,而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半數死亡時間在75 h左右,顯著長于野生菌感染小鼠組(P＜0.05).結論 在構建的4箇單箇基因缺失突變體中,spd-1672缺陷後S.pn生長明顯延遲,毒力顯著下降,提示spd-1672是S.pn的一箇新的毒力因子.
목적 감정기인spd-ABC、spd-1672、spd-1673화장간격서렬spd-J재폐염련구균(Streptococcus pneumoniae,S.pn)독력중적작용.방법 채용장비동원취합매련반응(LFH-PCR)적방법분별구건저4개서렬적홍매소항성기인(erm)체대결실돌변체,통과PCR화측서감정시부구건성공;통과회제생장곡선관찰기인대세균생장번식적영향,통과소서독력실험관찰기인대세균치병성적영향.결과 소구건결함균목적 기인유erm기인완전체대;spd-ABC、spd-1673화장간격서렬spd-J 3개편단결함균적생장추세여야생균몰유명현차이,생장대약5 h A치균가체도봉치,이spd-1672결함균출현명현적연지현상,생장8 h후기A치재체도최고치;야생균여결실spd-ABC、spd-1673화장간격서렬spd-J적결함균감염소서각조반수사망시간분별위19、22、24화24 h,차이무통계학의의,이spd-1672결함균감염소서적반수사망시간재75 h좌우,현저장우야생균감염소서조(P＜0.05).결론 재구건적4개단개기인결실돌변체중,spd-1672결함후S.pn생장명현연지,독력현저하강,제시spd-1672시S.pn적일개신적독력인자.
