检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2011年
12期
806-810
,共5页
周珊%徐修礼%马越云%刘家云%樊新%孙怡群%郝晓柯
週珊%徐脩禮%馬越雲%劉傢雲%樊新%孫怡群%郝曉柯
주산%서수례%마월운%류가운%번신%손이군%학효가
肝素结合血凝素蛋白%多克隆抗体%结核分枝杆菌
肝素結閤血凝素蛋白%多剋隆抗體%結覈分枝桿菌
간소결합혈응소단백%다극륭항체%결핵분지간균
目的 制备天然和重组肝素结合血凝素(HBHA)蛋白,探讨其在结核杆菌感染诊断中的应用价值.方法 用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37 Rv基因组扩增出HBHA基因片段.结核分枝杆菌HBHA基因克隆至PQE80L克隆表达载体中,序列测定正确后,将其转化到大肠埃希菌BL-21中,再经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达HBHA蛋白,表达蛋白经SDS-PAGE及免疫印迹法分析后,亲和层析法纯化蛋白,并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体.同时将7H9液体培养基中的卡介苗(BCG)培养至稳定生长期,用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白.观察抗体对不同浓度天然HBHA和重组HBHA诱导BCG聚集效应的影响.结果 所得天然和重组HBHA蛋白均有诱导BCG聚集的作用,并均可被多克隆抗体抑制.结论 成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白；证实了两者均具有促进BCG聚集的功能,并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制.从而为进一步研究HBHA的临床诊断价值提供了实验依据.
目的 製備天然和重組肝素結閤血凝素(HBHA)蛋白,探討其在結覈桿菌感染診斷中的應用價值.方法 用聚閤酶鏈反應從結覈分枝桿菌H37 Rv基因組擴增齣HBHA基因片段.結覈分枝桿菌HBHA基因剋隆至PQE80L剋隆錶達載體中,序列測定正確後,將其轉化到大腸埃希菌BL-21中,再經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達HBHA蛋白,錶達蛋白經SDS-PAGE及免疫印跡法分析後,親和層析法純化蛋白,併以此免疫新西蘭兔製備多剋隆抗體.同時將7H9液體培養基中的卡介苗(BCG)培養至穩定生長期,用CL-6B層析柱分離純化HBHA蛋白.觀察抗體對不同濃度天然HBHA和重組HBHA誘導BCG聚集效應的影響.結果 所得天然和重組HBHA蛋白均有誘導BCG聚集的作用,併均可被多剋隆抗體抑製.結論 成功穫得天然HBHA和重組HBHA蛋白；證實瞭兩者均具有促進BCG聚集的功能,併可被由重組HBHA誘導產生的多剋隆抗體所抑製.從而為進一步研究HBHA的臨床診斷價值提供瞭實驗依據.
목적 제비천연화중조간소결합혈응소(HBHA)단백,탐토기재결핵간균감염진단중적응용개치.방법 용취합매련반응종결핵분지간균H37 Rv기인조확증출HBHA기인편단.결핵분지간균HBHA기인극륭지PQE80L극륭표체재체중,서렬측정정학후,장기전화도대장애희균BL-21중,재경이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체HBHA단백,표체단백경SDS-PAGE급면역인적법분석후,친화층석법순화단백,병이차면역신서란토제비다극륭항체.동시장7H9액체배양기중적잡개묘(BCG)배양지은정생장기,용CL-6B층석주분리순화HBHA단백.관찰항체대불동농도천연HBHA화중조HBHA유도BCG취집효응적영향.결과 소득천연화중조HBHA단백균유유도BCG취집적작용,병균가피다극륭항체억제.결론 성공획득천연HBHA화중조HBHA단백；증실료량자균구유촉진BCG취집적공능,병가피유중조HBHA유도산생적다극륭항체소억제.종이위진일보연구HBHA적림상진단개치제공료실험의거.
