山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
16期
1-3,6
,共4页
沈涛%杨礼庆%李妍%梁峰%梁爽%付勤
瀋濤%楊禮慶%李妍%樑峰%樑爽%付勤
침도%양례경%리연%량봉%량상%부근
hPlk2%原核细胞%表达%融合蛋白
hPlk2%原覈細胞%錶達%融閤蛋白
hPlk2%원핵세포%표체%융합단백
目的 构建GST-hPlk2融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出hPlk2基因全长,通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hPlk2,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,通过限制性内切酶酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入Ecoli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.结果 酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-hPlk2,并用Western blot方法证实了GST-hPlk2融合蛋白的表达.结论 成功构建了GST-hPlk2原核表达载体,并证实了其在原核细胞E coli中的表达,为进一步纯化Plk2及研究其结构与功能提供了前提基础.
目的 構建GST-hPlk2融閤蛋白錶達載體,併在原覈細胞大腸埃希菌(E.coli)中誘導錶達.方法 從人HEK293細胞中提取mRNA,反轉錄為cDNA.用PCR方法擴增齣hPlk2基因全長,通過BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位點將其定嚮插入pGEX-4T-2載體中,構建原覈錶達質粒pGEX-4T-2-hPlk2,併轉化E.coli DH5α,篩選暘性重組子,通過限製性內切酶酶切電泳鑒定和DNA序列測定正確後,轉入Ecoli BL21中,經異丙基硫代β-D半乳糖苷大量誘導錶達,SDS-PAGE電泳和Western blot鑒定.結果 酶切電泳及測序結果證明,成功構建瞭原覈錶達質粒GST-hPlk2,併用Western blot方法證實瞭GST-hPlk2融閤蛋白的錶達.結論 成功構建瞭GST-hPlk2原覈錶達載體,併證實瞭其在原覈細胞E coli中的錶達,為進一步純化Plk2及研究其結構與功能提供瞭前提基礎.
목적 구건GST-hPlk2융합단백표체재체,병재원핵세포대장애희균(E.coli)중유도표체.방법 종인HEK293세포중제취mRNA,반전록위cDNA.용PCR방법확증출hPlk2기인전장,통과BamH Ⅰ화Xho Ⅰ매절위점장기정향삽입pGEX-4T-2재체중,구건원핵표체질립pGEX-4T-2-hPlk2,병전화E.coli DH5α,사선양성중조자,통과한제성내절매매절전영감정화DNA서렬측정정학후,전입Ecoli BL21중,경이병기류대β-D반유당감대량유도표체,SDS-PAGE전영화Western blot감정.결과 매절전영급측서결과증명,성공구건료원핵표체질립GST-hPlk2,병용Western blot방법증실료GST-hPlk2융합단백적표체.결론 성공구건료GST-hPlk2원핵표체재체,병증실료기재원핵세포E coli중적표체,위진일보순화Plk2급연구기결구여공능제공료전제기출.
