免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2005年
3期
252-255
,共4页
潘自铁%李鹏%刘秀娜%陈安%赵力军%胡川闽
潘自鐵%李鵬%劉秀娜%陳安%趙力軍%鬍川閩
반자철%리붕%류수나%진안%조력군%호천민
乳腺癌%人乳腺珠蛋白%原核表达系统%蛋白纯化
乳腺癌%人乳腺珠蛋白%原覈錶達繫統%蛋白純化
유선암%인유선주단백%원핵표체계통%단백순화
目的克隆hMAM编码全长cDNA,建立hMAM蛋白原核表达系统及其纯化方法,为进一步研究hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定工作基础.方法自乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆bMAMcDNA,构建pGEX-KG-hMAM表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达,鉴定表达产物的形式后建立目的蛋白的纯化方法.结果乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAMcDNA亚型:hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,二者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;GST-hMAM蛋白在本原核表达系统中以不溶性包涵体形式存在,通过改良的纯化方案可以获得纯化的复性蛋白.结论获得hMAMcDNA并发现一个新的hMAM突变体;hMAM可在pGEX-KG中与GST融合,实现高效表达;通过本法建立的改良的纯化流程,可获得纯度达96.5%的hMAM的两种融合蛋白,为进一步研究两种亚型hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定了工作基础.
目的剋隆hMAM編碼全長cDNA,建立hMAM蛋白原覈錶達繫統及其純化方法,為進一步研究hMAM的結構、功能及其在乳腺癌免疫診斷中的應用奠定工作基礎.方法自乳腺癌組織和乳腺癌細胞株MD-MB453提取總RNA,通過RT-PCR剋隆bMAMcDNA,構建pGEX-KG-hMAM錶達質粒,在大腸桿菌BL21中錶達,鑒定錶達產物的形式後建立目的蛋白的純化方法.結果乳腺癌組織和乳腺癌細胞株中髮現兩種hMAMcDNA亞型:hMAM和hMAM(Isoform),長度分彆為279和270bp,二者相差9箇連續堿基,其翻譯產物相差3箇連續氨基痠殘基;GST-hMAM蛋白在本原覈錶達繫統中以不溶性包涵體形式存在,通過改良的純化方案可以穫得純化的複性蛋白.結論穫得hMAMcDNA併髮現一箇新的hMAM突變體;hMAM可在pGEX-KG中與GST融閤,實現高效錶達;通過本法建立的改良的純化流程,可穫得純度達96.5%的hMAM的兩種融閤蛋白,為進一步研究兩種亞型hMAM的結構、功能及其在乳腺癌免疫診斷中的應用奠定瞭工作基礎.
목적극륭hMAM편마전장cDNA,건립hMAM단백원핵표체계통급기순화방법,위진일보연구hMAM적결구、공능급기재유선암면역진단중적응용전정공작기출.방법자유선암조직화유선암세포주MD-MB453제취총RNA,통과RT-PCR극륭bMAMcDNA,구건pGEX-KG-hMAM표체질립,재대장간균BL21중표체,감정표체산물적형식후건립목적단백적순화방법.결과유선암조직화유선암세포주중발현량충hMAMcDNA아형:hMAM화hMAM(Isoform),장도분별위279화270bp,이자상차9개련속감기,기번역산물상차3개련속안기산잔기;GST-hMAM단백재본원핵표체계통중이불용성포함체형식존재,통과개량적순화방안가이획득순화적복성단백.결론획득hMAMcDNA병발현일개신적hMAM돌변체;hMAM가재pGEX-KG중여GST융합,실현고효표체;통과본법건립적개량적순화류정,가획득순도체96.5%적hMAM적량충융합단백,위진일보연구량충아형hMAM적결구、공능급기재유선암면역진단중적응용전정료공작기출.
