肿瘤防治研究
腫瘤防治研究
종류방치연구
CANCER RESEARCH ON PREVENTION AND TREATMENT
2007年
3期
178-181
,共4页
侯桂琴%鲁照明%薛乐勋%田芳%范天黎%刘兰琦%许培荣
侯桂琴%魯照明%薛樂勛%田芳%範天黎%劉蘭琦%許培榮
후계금%로조명%설악훈%전방%범천려%류란기%허배영
PTEN%食管鳞癌%mTOR%转染
PTEN%食管鱗癌%mTOR%轉染
PTEN%식관린암%mTOR%전염
目的 筛选稳定表达野生型PTEN基因的食管鳞癌细胞株EC9706.方法 提取胎盘总RNA,设计引物,PCR扩增人野生型PTEN基因,经测序鉴定后,连接于pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建pcDNA3.1-PTEN,用脂质体介导的方法将其转染EC9706.而后加抗生素G418筛选稳定表达株,用RT-PCR方法检测稳定表达株PTEN基因的mRNA水平,通过绘制生长曲线观察细胞生长情况.结果 PCR产物的电泳结果显示,在1 500bp左右有一明显亮带,测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致;稳定表达PTEN基因的细胞株RT-PCR结果显示,PTEN的mRNA水平比对照细胞株相比明显升高;生长曲线结果显示,转染后的细胞生长速度明显减慢.结论 所扩基因为野生型PTEN基因,所构建的载体为野生型PTEN基因真核表达载体,并筛选出PTEN基因稳定表达的食管鳞癌细胞株.
目的 篩選穩定錶達野生型PTEN基因的食管鱗癌細胞株EC9706.方法 提取胎盤總RNA,設計引物,PCR擴增人野生型PTEN基因,經測序鑒定後,連接于pcDNA3.1(+)真覈錶達載體,構建pcDNA3.1-PTEN,用脂質體介導的方法將其轉染EC9706.而後加抗生素G418篩選穩定錶達株,用RT-PCR方法檢測穩定錶達株PTEN基因的mRNA水平,通過繪製生長麯線觀察細胞生長情況.結果 PCR產物的電泳結果顯示,在1 500bp左右有一明顯亮帶,測序結果與GenBank上PTEN序列完全一緻;穩定錶達PTEN基因的細胞株RT-PCR結果顯示,PTEN的mRNA水平比對照細胞株相比明顯升高;生長麯線結果顯示,轉染後的細胞生長速度明顯減慢.結論 所擴基因為野生型PTEN基因,所構建的載體為野生型PTEN基因真覈錶達載體,併篩選齣PTEN基因穩定錶達的食管鱗癌細胞株.
목적 사선은정표체야생형PTEN기인적식관린암세포주EC9706.방법 제취태반총RNA,설계인물,PCR확증인야생형PTEN기인,경측서감정후,련접우pcDNA3.1(+)진핵표체재체,구건pcDNA3.1-PTEN,용지질체개도적방법장기전염EC9706.이후가항생소G418사선은정표체주,용RT-PCR방법검측은정표체주PTEN기인적mRNA수평,통과회제생장곡선관찰세포생장정황.결과 PCR산물적전영결과현시,재1 500bp좌우유일명현량대,측서결과여GenBank상PTEN서렬완전일치;은정표체PTEN기인적세포주RT-PCR결과현시,PTEN적mRNA수평비대조세포주상비명현승고;생장곡선결과현시,전염후적세포생장속도명현감만.결론 소확기인위야생형PTEN기인,소구건적재체위야생형PTEN기인진핵표체재체,병사선출PTEN기인은정표체적식관린암세포주.
