中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
2期
21-24
,共4页
牛晓霞%田雅峰%刘金毅%吴晓东
牛曉霞%田雅峰%劉金毅%吳曉東
우효하%전아봉%류금의%오효동
sApo2L%Fc融合蛋白%CHO细胞%真核表达系统
sApo2L%Fc融閤蛋白%CHO細胞%真覈錶達繫統
sApo2L%Fc융합단백%CHO세포%진핵표체계통
目的:构建人sApo2L-Fc分子,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达有生物学活性的人Apo2L-Fc融合蛋白. 方法:将sApo2L-Fc基因克隆入pcDNA3.1(+)表达载体,重组质粒转化大肠杆菌DH5α.挑取阳性克隆扩大培养,提取质粒进行酶切鉴定;采用脂质体法将重组质粒转入CHO细胞,经G418加压筛选、ELISA检测,挑选表达较高的阳性转化子扩大培养;表达的sApo2L-Fc融合蛋白经Protein A亲和柱纯化,纯化产物用SDS-PAGE,Western blotting检测样品的分子量及免疫原性,用L929细胞进行生物活性测定. 结果:酶切鉴定及测序显示重组子构建与预想一致;ELISA证实了sApo2L-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达;SDS-PAGE检测到纯化产物的分子量与理论分子量相符;在同样的位置,Western blotting显示阳性;L929细胞测定:纯化产物的生物学活性达1.0×105IU/mg. 结论:构建了sApo2L-Fc的表达载体,并成功地在CHO中表达,表达的sApo2L-Fc融合蛋白具有生物学活性.
目的:構建人sApo2L-Fc分子,在中國倉鼠卵巢細胞(CHO)中錶達有生物學活性的人Apo2L-Fc融閤蛋白. 方法:將sApo2L-Fc基因剋隆入pcDNA3.1(+)錶達載體,重組質粒轉化大腸桿菌DH5α.挑取暘性剋隆擴大培養,提取質粒進行酶切鑒定;採用脂質體法將重組質粒轉入CHO細胞,經G418加壓篩選、ELISA檢測,挑選錶達較高的暘性轉化子擴大培養;錶達的sApo2L-Fc融閤蛋白經Protein A親和柱純化,純化產物用SDS-PAGE,Western blotting檢測樣品的分子量及免疫原性,用L929細胞進行生物活性測定. 結果:酶切鑒定及測序顯示重組子構建與預想一緻;ELISA證實瞭sApo2L-Fc融閤蛋白在CHO細胞中的錶達;SDS-PAGE檢測到純化產物的分子量與理論分子量相符;在同樣的位置,Western blotting顯示暘性;L929細胞測定:純化產物的生物學活性達1.0×105IU/mg. 結論:構建瞭sApo2L-Fc的錶達載體,併成功地在CHO中錶達,錶達的sApo2L-Fc融閤蛋白具有生物學活性.
목적:구건인sApo2L-Fc분자,재중국창서란소세포(CHO)중표체유생물학활성적인Apo2L-Fc융합단백. 방법:장sApo2L-Fc기인극륭입pcDNA3.1(+)표체재체,중조질립전화대장간균DH5α.도취양성극륭확대배양,제취질립진행매절감정;채용지질체법장중조질립전입CHO세포,경G418가압사선、ELISA검측,도선표체교고적양성전화자확대배양;표체적sApo2L-Fc융합단백경Protein A친화주순화,순화산물용SDS-PAGE,Western blotting검측양품적분자량급면역원성,용L929세포진행생물활성측정. 결과:매절감정급측서현시중조자구건여예상일치;ELISA증실료sApo2L-Fc융합단백재CHO세포중적표체;SDS-PAGE검측도순화산물적분자량여이론분자량상부;재동양적위치,Western blotting현시양성;L929세포측정:순화산물적생물학활성체1.0×105IU/mg. 결론:구건료sApo2L-Fc적표체재체,병성공지재CHO중표체,표체적sApo2L-Fc융합단백구유생물학활성.
