畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
1期
57-60
,共4页
崔茂盛%冯冲%张金龙%张效生%李义海%冯建忠
崔茂盛%馮遲%張金龍%張效生%李義海%馮建忠
최무성%풍충%장금룡%장효생%리의해%풍건충
绵羊%体细胞%基因转染%克隆
綿羊%體細胞%基因轉染%剋隆
면양%체세포%기인전염%극륭
首先获得绵羊胎儿成纤维细胞、成年耳组织成纤维细胞及前脂肪细胞,用脂质体介导法、BTX电转法及Nucleofector核转法对上述细胞系转染绿色荧光蛋白(gfp)基因,并对转染效率进行比较,最后探讨3种转gfp基因细胞对绵羊转基克隆胚发育的影响.结果:核转法的转基因效率最高,3种细胞的转基因效率分别为86％,87％和90％,显著高于BTX电转法和脂质体法基因转染效率；脂质体转染效率显著低于BTX电转效率(P＜0.05).而对同一种转染方法而言,基因转染效率在3种细胞间差异均不显著(P＞0.05).在以上述3种转基因细胞为核供体的转基因克隆试验中,胚胎融合率、卵裂率均无显著性差异(P＞0.05),胎儿成纤维细胞组的囊胚率显著高于前脂肪细胞组(P＜0.05),但耳组织成纤维细胞组与胎儿成纤维细胞、前脂肪细胞间差异均不显著(P＞0.05).结果表明核转法基因转染效率最高,胎儿成纤维细胞最适合于胚胎克隆研究.
首先穫得綿羊胎兒成纖維細胞、成年耳組織成纖維細胞及前脂肪細胞,用脂質體介導法、BTX電轉法及Nucleofector覈轉法對上述細胞繫轉染綠色熒光蛋白(gfp)基因,併對轉染效率進行比較,最後探討3種轉gfp基因細胞對綿羊轉基剋隆胚髮育的影響.結果:覈轉法的轉基因效率最高,3種細胞的轉基因效率分彆為86％,87％和90％,顯著高于BTX電轉法和脂質體法基因轉染效率；脂質體轉染效率顯著低于BTX電轉效率(P＜0.05).而對同一種轉染方法而言,基因轉染效率在3種細胞間差異均不顯著(P＞0.05).在以上述3種轉基因細胞為覈供體的轉基因剋隆試驗中,胚胎融閤率、卵裂率均無顯著性差異(P＞0.05),胎兒成纖維細胞組的囊胚率顯著高于前脂肪細胞組(P＜0.05),但耳組織成纖維細胞組與胎兒成纖維細胞、前脂肪細胞間差異均不顯著(P＞0.05).結果錶明覈轉法基因轉染效率最高,胎兒成纖維細胞最適閤于胚胎剋隆研究.
수선획득면양태인성섬유세포、성년이조직성섬유세포급전지방세포,용지질체개도법、BTX전전법급Nucleofector핵전법대상술세포계전염록색형광단백(gfp)기인,병대전염효솔진행비교,최후탐토3충전gfp기인세포대면양전기극륭배발육적영향.결과:핵전법적전기인효솔최고,3충세포적전기인효솔분별위86％,87％화90％,현저고우BTX전전법화지질체법기인전염효솔；지질체전염효솔현저저우BTX전전효솔(P＜0.05).이대동일충전염방법이언,기인전염효솔재3충세포간차이균불현저(P＞0.05).재이상술3충전기인세포위핵공체적전기인극륭시험중,배태융합솔、란렬솔균무현저성차이(P＞0.05),태인성섬유세포조적낭배솔현저고우전지방세포조(P＜0.05),단이조직성섬유세포조여태인성섬유세포、전지방세포간차이균불현저(P＞0.05).결과표명핵전법기인전염효솔최고,태인성섬유세포최괄합우배태극륭연구.
