现代临床医学生物工程学杂志
現代臨床醫學生物工程學雜誌
현대림상의학생물공정학잡지
2006年
3期
288-290
,共3页
程璘令%李冰%涂洪斌%刘启才%冉丕鑫
程璘令%李冰%塗洪斌%劉啟纔%冉丕鑫
정린령%리빙%도홍빈%류계재%염비흠
嵌套缺失法%酚筛选法%缺失突变体
嵌套缺失法%酚篩選法%缺失突變體
감투결실법%분사선법%결실돌변체
目的 介绍一种快捷、无突变的目的基因缺失体构建和鉴定方法.方法 用Mlu I 和 Sac I酶将GCLC/pGL3在GCLC基因与pGL3连接处切开,形成以GCLC端为3'凹端而pGL3载体端为3'凸端的线型载体.利用外切核酸酶Ⅲ从GCLC基因端(3'凹端)单向逐一切除GCLC基因上的核苷酸,并在不同的时间终止其反应以获得一系列的GCLC基因缺失体.将GCLC基因缺失体与pGL3载体自身环化构建成GCLC基因序列缺失体的pGL3报道载体.最后用酚抽提和凝胶电泳法粗略挑选出不同长度的GCLC/pGL3缺失突变体.结果 利用嵌套缺失法构建出各种长度的GCLC基因的缺失突变体,且不存在基因突变的现象.利用酚筛选法快速鉴定出29种不同长度的缺失突变体.结论 联合利用嵌套缺失和酚筛选法可以高保真而快速地构建和鉴定目的基因的缺失突变体.
目的 介紹一種快捷、無突變的目的基因缺失體構建和鑒定方法.方法 用Mlu I 和 Sac I酶將GCLC/pGL3在GCLC基因與pGL3連接處切開,形成以GCLC耑為3'凹耑而pGL3載體耑為3'凸耑的線型載體.利用外切覈痠酶Ⅲ從GCLC基因耑(3'凹耑)單嚮逐一切除GCLC基因上的覈苷痠,併在不同的時間終止其反應以穫得一繫列的GCLC基因缺失體.將GCLC基因缺失體與pGL3載體自身環化構建成GCLC基因序列缺失體的pGL3報道載體.最後用酚抽提和凝膠電泳法粗略挑選齣不同長度的GCLC/pGL3缺失突變體.結果 利用嵌套缺失法構建齣各種長度的GCLC基因的缺失突變體,且不存在基因突變的現象.利用酚篩選法快速鑒定齣29種不同長度的缺失突變體.結論 聯閤利用嵌套缺失和酚篩選法可以高保真而快速地構建和鑒定目的基因的缺失突變體.
목적 개소일충쾌첩、무돌변적목적기인결실체구건화감정방법.방법 용Mlu I 화 Sac I매장GCLC/pGL3재GCLC기인여pGL3련접처절개,형성이GCLC단위3'요단이pGL3재체단위3'철단적선형재체.이용외절핵산매Ⅲ종GCLC기인단(3'요단)단향축일절제GCLC기인상적핵감산,병재불동적시간종지기반응이획득일계렬적GCLC기인결실체.장GCLC기인결실체여pGL3재체자신배화구건성GCLC기인서렬결실체적pGL3보도재체.최후용분추제화응효전영법조략도선출불동장도적GCLC/pGL3결실돌변체.결과 이용감투결실법구건출각충장도적GCLC기인적결실돌변체,차불존재기인돌변적현상.이용분사선법쾌속감정출29충불동장도적결실돌변체.결론 연합이용감투결실화분사선법가이고보진이쾌속지구건화감정목적기인적결실돌변체.
