眼科研究
眼科研究
안과연구
CHINESE OPHTHALMIC RESEARCH
2010年
11期
1025-1028
,共4页
角膜基质细胞%反义cyclinD1基因%脂质体%基因转染
角膜基質細胞%反義cyclinD1基因%脂質體%基因轉染
각막기질세포%반의cyclinD1기인%지질체%기인전염
目的 探讨反义cyclinD1基因转染后人角膜基质细胞增生的改变.方法 人角膜组织来源于北京大学第一医院眼库体外培养人角膜基质细胞,采用第2代或第3代细胞用于实验.利用阳离子脂质体lipofectamine介导反义cyclinD1基因转染入体外培养的人角膜基质细胞.同时设非转染组(以PBS代替cyclinD1质粒及lipofectamine)及lipofectamine转染组(以PBS代替反义cyclinD1质粒)作为对照.应用免疫细胞化学法观察lipofectamine介导反义cyclinD1基因转染对人角膜基质细胞中cyclinD1蛋白表达的影响,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察其对人角膜基质细胞增生的影响,并用质量分数0.5%锥虫蓝染色观察活细胞比率.结果 非转染组和lipofectamine转染组均有大量人角膜基质细胞的细胞核cyclinD1染色呈棕褐色,反义cyclinD1转染组只有少量人角膜基质细胞细胞核cyclinD1染色呈棕褐色.与非转染组和lipofectamine转染组比较,反义cyclinD1转染组在转染后2、6、10d cyclinD1蛋白在培养的人角膜基质细胞中的表达明显降低,差异均有统计学意义(t=6.050、t=5.180、t=5.040,P＜0.01;t=6.190、t=5.670、t=5.010,P＜0.01),而非转染组与lipofectamine转染组间比较,差异均无统计学意义(t=1.120、t=1.310、t=1.010,P＞0.05).转染后2、6、10d,反义cyclinD1转染组人角膜基质细胞的A570值分别低于非转染组和lipofectamine转染组,差异均有统计学意义(t=5.830、t=5.210、t=4.920,P＜0.01;t=5.130、t=5.010、t=4.850,P＜0.01),说明抑制了基质细胞的增生,而非转染组与lipofectamine转染组间比较,差异均无统计学意义(t=1.110、t=1.230、t=1.120,P＞0.05).0.5%锥虫蓝染色显示各组活细胞比率均在90%以上,未见明显的细胞毒性.结论 阳离子脂质体介导的反义cyclinD1基因转染在转染后一定时间内可降低人角膜基质细胞中cyclinD1蛋白的表达,抑制人角膜基质细胞的增生,未见明显细胞毒性,为角膜基质过度愈合反应的基因治疗奠定了基础.
目的 探討反義cyclinD1基因轉染後人角膜基質細胞增生的改變.方法 人角膜組織來源于北京大學第一醫院眼庫體外培養人角膜基質細胞,採用第2代或第3代細胞用于實驗.利用暘離子脂質體lipofectamine介導反義cyclinD1基因轉染入體外培養的人角膜基質細胞.同時設非轉染組(以PBS代替cyclinD1質粒及lipofectamine)及lipofectamine轉染組(以PBS代替反義cyclinD1質粒)作為對照.應用免疫細胞化學法觀察lipofectamine介導反義cyclinD1基因轉染對人角膜基質細胞中cyclinD1蛋白錶達的影響,應用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法觀察其對人角膜基質細胞增生的影響,併用質量分數0.5%錐蟲藍染色觀察活細胞比率.結果 非轉染組和lipofectamine轉染組均有大量人角膜基質細胞的細胞覈cyclinD1染色呈棕褐色,反義cyclinD1轉染組隻有少量人角膜基質細胞細胞覈cyclinD1染色呈棕褐色.與非轉染組和lipofectamine轉染組比較,反義cyclinD1轉染組在轉染後2、6、10d cyclinD1蛋白在培養的人角膜基質細胞中的錶達明顯降低,差異均有統計學意義(t=6.050、t=5.180、t=5.040,P＜0.01;t=6.190、t=5.670、t=5.010,P＜0.01),而非轉染組與lipofectamine轉染組間比較,差異均無統計學意義(t=1.120、t=1.310、t=1.010,P＞0.05).轉染後2、6、10d,反義cyclinD1轉染組人角膜基質細胞的A570值分彆低于非轉染組和lipofectamine轉染組,差異均有統計學意義(t=5.830、t=5.210、t=4.920,P＜0.01;t=5.130、t=5.010、t=4.850,P＜0.01),說明抑製瞭基質細胞的增生,而非轉染組與lipofectamine轉染組間比較,差異均無統計學意義(t=1.110、t=1.230、t=1.120,P＞0.05).0.5%錐蟲藍染色顯示各組活細胞比率均在90%以上,未見明顯的細胞毒性.結論 暘離子脂質體介導的反義cyclinD1基因轉染在轉染後一定時間內可降低人角膜基質細胞中cyclinD1蛋白的錶達,抑製人角膜基質細胞的增生,未見明顯細胞毒性,為角膜基質過度愈閤反應的基因治療奠定瞭基礎.
목적 탐토반의cyclinD1기인전염후인각막기질세포증생적개변.방법 인각막조직래원우북경대학제일의원안고체외배양인각막기질세포,채용제2대혹제3대세포용우실험.이용양리자지질체lipofectamine개도반의cyclinD1기인전염입체외배양적인각막기질세포.동시설비전염조(이PBS대체cyclinD1질립급lipofectamine)급lipofectamine전염조(이PBS대체반의cyclinD1질립)작위대조.응용면역세포화학법관찰lipofectamine개도반의cyclinD1기인전염대인각막기질세포중cyclinD1단백표체적영향,응용사갑기우담서염(MTT)법관찰기대인각막기질세포증생적영향,병용질량분수0.5%추충람염색관찰활세포비솔.결과 비전염조화lipofectamine전염조균유대량인각막기질세포적세포핵cyclinD1염색정종갈색,반의cyclinD1전염조지유소량인각막기질세포세포핵cyclinD1염색정종갈색.여비전염조화lipofectamine전염조비교,반의cyclinD1전염조재전염후2、6、10d cyclinD1단백재배양적인각막기질세포중적표체명현강저,차이균유통계학의의(t=6.050、t=5.180、t=5.040,P＜0.01;t=6.190、t=5.670、t=5.010,P＜0.01),이비전염조여lipofectamine전염조간비교,차이균무통계학의의(t=1.120、t=1.310、t=1.010,P＞0.05).전염후2、6、10d,반의cyclinD1전염조인각막기질세포적A570치분별저우비전염조화lipofectamine전염조,차이균유통계학의의(t=5.830、t=5.210、t=4.920,P＜0.01;t=5.130、t=5.010、t=4.850,P＜0.01),설명억제료기질세포적증생,이비전염조여lipofectamine전염조간비교,차이균무통계학의의(t=1.110、t=1.230、t=1.120,P＞0.05).0.5%추충람염색현시각조활세포비솔균재90%이상,미견명현적세포독성.결론 양리자지질체개도적반의cyclinD1기인전염재전염후일정시간내가강저인각막기질세포중cyclinD1단백적표체,억제인각막기질세포적증생,미견명현세포독성,위각막기질과도유합반응적기인치료전정료기출.
