中国寄生虫病防治杂志
中國寄生蟲病防治雜誌
중국기생충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITIC DISEASE CONTROL
2004年
1期
49-52
,共4页
秦睿玲%张西臣%李建华%张伟信%尹继刚%杨举%田宗成
秦睿玲%張西臣%李建華%張偉信%尹繼剛%楊舉%田宗成
진예령%장서신%리건화%장위신%윤계강%양거%전종성
柔嫩艾美耳球虫GZ株%大肠杆菌%表达%Western blotting
柔嫩艾美耳毬蟲GZ株%大腸桿菌%錶達%Western blotting
유눈애미이구충GZ주%대장간균%표체%Western blotting
目的构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体,并且在大肠杆菌中表达. 方法将本室构建的pMD-Mz5-7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET-28b(+)载体上,构建成原核表达载体pET-28b-Mz5-7,酶切鉴定正确后,在Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,并经SDS-PAGE 及Western blotting 鉴定. 结果成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET-28b-Mz5-7,IPTG诱导表达该融合蛋白,SDS-PAGE电泳表明,其能表达一分子质量约为37 ku的融合蛋白,与预测分子质量相符,最佳反应条件为1 mol/L IPTG诱导4 h后表达量最高.薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18%,Western blotting结果显示,表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别,说明该融合蛋白具有很好的反应原性. 结论在原核细胞融合表达Mz5-7成功,为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础.
目的構建柔嫩艾美耳毬蟲子孢子錶麵抗原原覈錶達載體,併且在大腸桿菌中錶達. 方法將本室構建的pMD-Mz5-7剋隆質粒酶切迴收目的片段定嚮亞剋隆到pET-28b(+)載體上,構建成原覈錶達載體pET-28b-Mz5-7,酶切鑒定正確後,在Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG誘導錶達,併經SDS-PAGE 及Western blotting 鑒定. 結果成功構建瞭目的抗原基因的原覈重組錶達質粒pET-28b-Mz5-7,IPTG誘導錶達該融閤蛋白,SDS-PAGE電泳錶明,其能錶達一分子質量約為37 ku的融閤蛋白,與預測分子質量相符,最佳反應條件為1 mol/L IPTG誘導4 h後錶達量最高.薄層掃描顯示錶達的融閤蛋白佔菌體蛋白總量的18%,Western blotting結果顯示,錶達產物可被抗柔嫩艾美爾毬蟲的多剋隆抗體識彆,說明該融閤蛋白具有很好的反應原性. 結論在原覈細胞融閤錶達Mz5-7成功,為鷄毬蟲病重組苗的研究奠定瞭基礎.
목적구건유눈애미이구충자포자표면항원원핵표체재체,병차재대장간균중표체. 방법장본실구건적pMD-Mz5-7극륭질립매절회수목적편단정향아극륭도pET-28b(+)재체상,구건성원핵표체재체pET-28b-Mz5-7,매절감정정학후,재Escherichia coli BL21(DE3)중용IPTG유도표체,병경SDS-PAGE 급Western blotting 감정. 결과성공구건료목적항원기인적원핵중조표체질립pET-28b-Mz5-7,IPTG유도표체해융합단백,SDS-PAGE전영표명,기능표체일분자질량약위37 ku적융합단백,여예측분자질량상부,최가반응조건위1 mol/L IPTG유도4 h후표체량최고.박층소묘현시표체적융합단백점균체단백총량적18%,Western blotting결과현시,표체산물가피항유눈애미이구충적다극륭항체식별,설명해융합단백구유흔호적반응원성. 결론재원핵세포융합표체Mz5-7성공,위계구충병중조묘적연구전정료기출.
