生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
3期
361-365
,共5页
沈伟%杨正田%田利源%吴晓洁%陈宏%黄培堂%邓继先
瀋偉%楊正田%田利源%吳曉潔%陳宏%黃培堂%鄧繼先
침위%양정전%전리원%오효길%진굉%황배당%산계선
山羊%基因打靶%乳腺生物反应器%β-酪蛋白基因%ht-PAm基因
山羊%基因打靶%乳腺生物反應器%β-酪蛋白基因%ht-PAm基因
산양%기인타파%유선생물반응기%β-락단백기인%ht-PAm기인
利用体细胞基因打靶与核移植技术制备动物乳腺生物反应器是当今转基因定位整合表达的一种新技术.分别克隆山羊的β-酪蛋白基因5′调控区的6.3kb片段,外显子7、外显子8和9三个基因片段,并与克隆的人tPA突变体cDNA一起构建了含有neo和tk正负筛选标记基因的β-酪蛋白基因打靶载体pGBC4tPA,并验证了neo基因、tk基因以及Cre-LoxP系统的有效性.将线性化的pGBC4tPA通过电转染整合到山羊胎儿成纤维细胞基因组中,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,初步获得抗性细胞克隆244个,PCR检测后获得阳性细胞克隆31个,其中初步验证2个细胞克隆转植基因整合位点重组后的基因序列正确,并且该细胞克隆能够有效扩增.这为下一步基因打靶体细胞核移植制备山羊乳腺生物反应器奠定了基础.
利用體細胞基因打靶與覈移植技術製備動物乳腺生物反應器是噹今轉基因定位整閤錶達的一種新技術.分彆剋隆山羊的β-酪蛋白基因5′調控區的6.3kb片段,外顯子7、外顯子8和9三箇基因片段,併與剋隆的人tPA突變體cDNA一起構建瞭含有neo和tk正負篩選標記基因的β-酪蛋白基因打靶載體pGBC4tPA,併驗證瞭neo基因、tk基因以及Cre-LoxP繫統的有效性.將線性化的pGBC4tPA通過電轉染整閤到山羊胎兒成纖維細胞基因組中,利用G418和GANC進行抗性細胞剋隆的藥物篩選,初步穫得抗性細胞剋隆244箇,PCR檢測後穫得暘性細胞剋隆31箇,其中初步驗證2箇細胞剋隆轉植基因整閤位點重組後的基因序列正確,併且該細胞剋隆能夠有效擴增.這為下一步基因打靶體細胞覈移植製備山羊乳腺生物反應器奠定瞭基礎.
이용체세포기인타파여핵이식기술제비동물유선생물반응기시당금전기인정위정합표체적일충신기술.분별극륭산양적β-락단백기인5′조공구적6.3kb편단,외현자7、외현자8화9삼개기인편단,병여극륭적인tPA돌변체cDNA일기구건료함유neo화tk정부사선표기기인적β-락단백기인타파재체pGBC4tPA,병험증료neo기인、tk기인이급Cre-LoxP계통적유효성.장선성화적pGBC4tPA통과전전염정합도산양태인성섬유세포기인조중,이용G418화GANC진행항성세포극륭적약물사선,초보획득항성세포극륭244개,PCR검측후획득양성세포극륭31개,기중초보험증2개세포극륭전식기인정합위점중조후적기인서렬정학,병차해세포극륭능구유효확증.저위하일보기인타파체세포핵이식제비산양유선생물반응기전정료기출.
