微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
1期
22-26
,共5页
赵志强%方悦群%杜琳%谢贵林
趙誌彊%方悅群%杜琳%謝貴林
조지강%방열군%두림%사귀림
铜绿假单胞菌外毒素A%分泌性表达%Vero细胞毒性
銅綠假單胞菌外毒素A%分泌性錶達%Vero細胞毒性
동록가단포균외독소A%분비성표체%Vero세포독성
利用PCR技术从铜绿假单胞菌PA103株DNA中扩增到铜绿假单胞菌外毒素A(EPA)全基因,选择合适位点插入pBV221 PLPR启动子下游,构建分泌性表达载体;转化宿主E.coli DH5α、JM109后,热诱导表达;SDS-PAGE分析表明表达产物占菌体总蛋白量的17%左右,分子量69kD左右;分离细胞组分蛋白发现仅有少量重组蛋白以成熟毒素形式分泌到宿主菌的周质间隙,并能检测到Vero细胞毒活性,其余大部分以包涵体形式存在.免疫印迹检测显示,表达产物与兔抗EPA多抗有特异性反应.此项工作为重组EPA的研制建立了有用的技术方法.
利用PCR技術從銅綠假單胞菌PA103株DNA中擴增到銅綠假單胞菌外毒素A(EPA)全基因,選擇閤適位點插入pBV221 PLPR啟動子下遊,構建分泌性錶達載體;轉化宿主E.coli DH5α、JM109後,熱誘導錶達;SDS-PAGE分析錶明錶達產物佔菌體總蛋白量的17%左右,分子量69kD左右;分離細胞組分蛋白髮現僅有少量重組蛋白以成熟毒素形式分泌到宿主菌的週質間隙,併能檢測到Vero細胞毒活性,其餘大部分以包涵體形式存在.免疫印跡檢測顯示,錶達產物與兔抗EPA多抗有特異性反應.此項工作為重組EPA的研製建立瞭有用的技術方法.
이용PCR기술종동록가단포균PA103주DNA중확증도동록가단포균외독소A(EPA)전기인,선택합괄위점삽입pBV221 PLPR계동자하유,구건분비성표체재체;전화숙주E.coli DH5α、JM109후,열유도표체;SDS-PAGE분석표명표체산물점균체총단백량적17%좌우,분자량69kD좌우;분리세포조분단백발현부유소량중조단백이성숙독소형식분비도숙주균적주질간극,병능검측도Vero세포독활성,기여대부분이포함체형식존재.면역인적검측현시,표체산물여토항EPA다항유특이성반응.차항공작위중조EPA적연제건립료유용적기술방법.
