CAJ | 학술논문

目的观察阳离子脂质体介导的β1受体反义基因对H9C2心肌细胞B1受体mRNA及受体蛋白表达的影响,寻求最佳转染比率.方法 H9C-2心肌细胞,用去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)刺激24 h后转染β1受体反义寡核苷酸(β1 antisense oligonucleotide,β1-AS-ODN),脂质体与B1-AS-ODN的混合摩尔比为2.0、2.5和3.0,分别转染18 h、24 h和36 h;在倒置荧光显微镜下观察心肌细胞的形态;用免疫印迹技术测定心肌细胞β1受体蛋白的时间表达曲线.实验分为4组:NE组、NE加β1受体反向寡核苷酸(β1 inverse oligonueleotides,β1-IN-ODN)组、NE加β1-AS-ODN组、心肌细胞组,用半定量逆转录多聚酶链反应检测心肌细胞β1受体mRNA的表达.结果 β1-AS-ODN分布在心肌细胞的胞浆及细胞核中,转染24 h效率达70%,此后平缓降低;NE组的心肌细胞β1受体蛋白显著升高;与NE组相比,脂质体与β1-AS-ODN的混合摩尔比2.0、2.5,和3.0的心肌细胞β1受体蛋白显著降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);与心肌细胞组比较,NE组和β1-IN-ODN组的心肌细胞B1受体mRNA和受体蛋白显著升高(P＜0.01);与NE组相比,NE加AS-ODN组的心肌细胞β1受体mRNA和受体蛋白显著降低(Pβ0.01).结论阳离子脂质体与β1-AS-ODN比率为2.5转染24 h效果最好,其机制可能是通过激活核糖核酸酶H降解靶mRNA,在转录和翻译水平抑制目的基因表达.
목적 관찰양리자지질체개도적β1수체반의기인대H9C2심기세포B1수체mRNA급수체단백표체적영향,심구최가전염비솔.방법 H9C-2심기세포,용거갑신상선소(norepinephrine,NE)자격24 h후전염β1수체반의과핵감산(β1 antisense oligonucleotide,β1-AS-ODN),지질체여B1-AS-ODN적혼합마이비위2.0、2.5화3.0,분별전염18 h、24 h화36 h;재도치형광현미경하관찰심기세포적형태;용면역인적기술측정심기세포β1수체단백적시간표체곡선.실험분위4조:NE조、NE가β1수체반향과핵감산(β1 inverse oligonueleotides,β1-IN-ODN)조、NE가β1-AS-ODN조、심기세포조,용반정량역전록다취매련반응검측심기세포β1수체mRNA적표체.결과 β1-AS-ODN분포재심기세포적포장급세포핵중,전염24 h효솔체70%,차후평완강저;NE조적심기세포β1수체단백현저승고;여NE조상비,지질체여β1-AS-ODN적혼합마이비2.0、2.5,화3.0적심기세포β1수체단백현저강저(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);여심기세포조비교,NE조화β1-IN-ODN조적심기세포B1수체mRNA화수체단백현저승고(P＜0.01);여NE조상비,NE가AS-ODN조적심기세포β1수체mRNA화수체단백현저강저(Pβ0.01).결론 양리자지질체여β1-AS-ODN비솔위2.5전염24 h효과최호,기궤제가능시통과격활핵당핵산매H강해파mRNA,재전록화번역수평억제목적기인표체.