分子细胞生物学报
分子細胞生物學報
분자세포생물학보
JOURNAL OF MOLECULAR CELL BIOLOGY
2008年
6期
465-472
,共8页
杨梅%张锋%林彬辉%苏新华%郭丽清%黄志鹏%关雄
楊梅%張鋒%林彬輝%囌新華%郭麗清%黃誌鵬%關雄
양매%장봉%림빈휘%소신화%곽려청%황지붕%관웅
aiiA基因%可溶性表达分离纯化%植物病害防治
aiiA基因%可溶性錶達分離純化%植物病害防治
aiiA기인%가용성표체분리순화%식물병해방치
AHLs是革兰氏阴性细菌在增殖过程中产生的一类信号分子,与其致病性密切相关.AiiA蛋白作为一种胞内解酯酶,能水解致病菌产生的AHLs分子,使内酯环开环后不能再激活某些胞外酶的表达,从而极大地减弱了细茵的致病性.本研究从苏云金芽孢杆菌LLB15中分离编码aiiA基因的质粒DNA,用PCR方法克隆aiiA基因,并利用pET载体构建6-His融合表达质粒pET29a-aiiA,转化E.coli BL21(DE3)茵株,并筛选得到E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA工程茵.在20℃的低温和0.8 mmol/L IPTG条件下,经25 h的诱导表达,获得了54.4μg/mL可溶性AiiA蛋白.通过镍柱亲和层析,在国内外首次纯化了带6-His标记的AiiA蛋白.水解活性和抗病性检测表明,该蛋白能水解AHLs分子,对胡萝卜欧文氏软腐病菌具有较强的抗病作用.
AHLs是革蘭氏陰性細菌在增殖過程中產生的一類信號分子,與其緻病性密切相關.AiiA蛋白作為一種胞內解酯酶,能水解緻病菌產生的AHLs分子,使內酯環開環後不能再激活某些胞外酶的錶達,從而極大地減弱瞭細茵的緻病性.本研究從囌雲金芽孢桿菌LLB15中分離編碼aiiA基因的質粒DNA,用PCR方法剋隆aiiA基因,併利用pET載體構建6-His融閤錶達質粒pET29a-aiiA,轉化E.coli BL21(DE3)茵株,併篩選得到E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA工程茵.在20℃的低溫和0.8 mmol/L IPTG條件下,經25 h的誘導錶達,穫得瞭54.4μg/mL可溶性AiiA蛋白.通過鎳柱親和層析,在國內外首次純化瞭帶6-His標記的AiiA蛋白.水解活性和抗病性檢測錶明,該蛋白能水解AHLs分子,對鬍蘿蔔歐文氏軟腐病菌具有較彊的抗病作用.
AHLs시혁란씨음성세균재증식과정중산생적일류신호분자,여기치병성밀절상관.AiiA단백작위일충포내해지매,능수해치병균산생적AHLs분자,사내지배개배후불능재격활모사포외매적표체,종이겁대지감약료세인적치병성.본연구종소운금아포간균LLB15중분리편마aiiA기인적질립DNA,용PCR방법극륭aiiA기인,병이용pET재체구건6-His융합표체질립pET29a-aiiA,전화E.coli BL21(DE3)인주,병사선득도E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA공정인.재20℃적저온화0.8 mmol/L IPTG조건하,경25 h적유도표체,획득료54.4μg/mL가용성AiiA단백.통과얼주친화층석,재국내외수차순화료대6-His표기적AiiA단백.수해활성화항병성검측표명,해단백능수해AHLs분자,대호라복구문씨연부병균구유교강적항병작용.
