畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
3期
431-437
,共7页
沈青春%王芳%韩明远%覃青松%范学政%杨汉春%宁宜宝
瀋青春%王芳%韓明遠%覃青鬆%範學政%楊漢春%寧宜寶
침청춘%왕방%한명원%담청송%범학정%양한춘%저의보
猪肺炎支原体%P46蛋白%原核表达%ELISA
豬肺炎支原體%P46蛋白%原覈錶達%ELISA
저폐염지원체%P46단백%원핵표체%ELISA
猪肺炎支原体是猪喘气病的病原体,本研究选择猪肺炎支原体P46膜蛋白基因亲水区序列进行克隆,并将其内3个编码Trp的TGA突变成TGG,然后再克隆到pET28a(+)载体中,在大肠杆菌BL21 (DE3)细胞内实现了高效表达,表达产物相对分子质量约为31 ku,约占菌体总蛋白35％,表达形式为包涵体,通过Western blotting 证明表达产物与猪肺炎支原体高免血清具有很好的反应原性和特异性.将大肠杆菌表达的猪肺炎支原体P46重组蛋白经过洗涤、过柱纯化后,作为间接ELISA包被抗原用于检测猪血清中猪肺炎支原体抗体,通过对各参数和试剂的优化建立了rP46-ELISA方法,获得了较好的效果,通过与现有ELISA检测方法的比较,结果表明二者间具有较高的符合率.
豬肺炎支原體是豬喘氣病的病原體,本研究選擇豬肺炎支原體P46膜蛋白基因親水區序列進行剋隆,併將其內3箇編碼Trp的TGA突變成TGG,然後再剋隆到pET28a(+)載體中,在大腸桿菌BL21 (DE3)細胞內實現瞭高效錶達,錶達產物相對分子質量約為31 ku,約佔菌體總蛋白35％,錶達形式為包涵體,通過Western blotting 證明錶達產物與豬肺炎支原體高免血清具有很好的反應原性和特異性.將大腸桿菌錶達的豬肺炎支原體P46重組蛋白經過洗滌、過柱純化後,作為間接ELISA包被抗原用于檢測豬血清中豬肺炎支原體抗體,通過對各參數和試劑的優化建立瞭rP46-ELISA方法,穫得瞭較好的效果,通過與現有ELISA檢測方法的比較,結果錶明二者間具有較高的符閤率.
저폐염지원체시저천기병적병원체,본연구선택저폐염지원체P46막단백기인친수구서렬진행극륭,병장기내3개편마Trp적TGA돌변성TGG,연후재극륭도pET28a(+)재체중,재대장간균BL21 (DE3)세포내실현료고효표체,표체산물상대분자질량약위31 ku,약점균체총단백35％,표체형식위포함체,통과Western blotting 증명표체산물여저폐염지원체고면혈청구유흔호적반응원성화특이성.장대장간균표체적저폐염지원체P46중조단백경과세조、과주순화후,작위간접ELISA포피항원용우검측저혈청중저폐염지원체항체,통과대각삼수화시제적우화건립료rP46-ELISA방법,획득료교호적효과,통과여현유ELISA검측방법적비교,결과표명이자간구유교고적부합솔.
