河北医药
河北醫藥
하북의약
HEBEI MEDICAL JOURNAL
2012年
16期
2405-2408
,共4页
PRDXⅢ%神经胶质瘤%RNA干扰%U251细胞%基因治疗
PRDXⅢ%神經膠質瘤%RNA榦擾%U251細胞%基因治療
PRDXⅢ%신경효질류%RNA간우%U251세포%기인치료
目的 探讨RNAi沉默PRDXⅢ基因表达诱导U251胶质瘤细胞凋亡.方法 设计合成针对PRDXⅢ的siRNA,脂质体介导转染人U251多形胶质母细胞瘤细胞,RT-PCR法检测转染后24 h PRDXⅢmRNA的表达水平,Western-blotting检测转染后48 h PRDXⅢ蛋白的表达水平,筛选出有效的干扰序列;流式细胞仪、DNAladder、PI染色检测转染后48 hU251细胞的凋亡状况,MTT检测转染后48 h U251细胞的生长抑制率.结果 RT-PCR、Western Blotting检测显示空白对照组、空载体组和无关序列组PRDXⅢmRNA表达无明显变化,干扰序列1、3使PRDXⅢmRNA的表达明显降低.DNA ladder显示干扰组出现明显梯形电泳条带,空白对照组、空载体组和无关序列组细胞未见明显梯形电泳条带.PI染色结果显示空白对照组,空载体组和无关序列组细胞未见明显凋亡,而干扰组细胞核的染色质高度浓染,部分细胞核裂解为碎块,符合凋亡形态学的改变.FCM检测结果显示干扰组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体组、无关序列组(P<0.01).MTT检测干扰组对U251细胞生长的抑制率为44.4%,明显减慢了细胞生长(P<0.01).结论 RNAi技术成功地抑制了U251细胞中PRDXⅢ基因的表达,并诱导U251细胞凋亡,表明PRDXⅢ基因与胶质瘤的凋亡有关,PRDXⅢ基因有可能成为胶质瘤基因治疗的靶基因.
目的 探討RNAi沉默PRDXⅢ基因錶達誘導U251膠質瘤細胞凋亡.方法 設計閤成針對PRDXⅢ的siRNA,脂質體介導轉染人U251多形膠質母細胞瘤細胞,RT-PCR法檢測轉染後24 h PRDXⅢmRNA的錶達水平,Western-blotting檢測轉染後48 h PRDXⅢ蛋白的錶達水平,篩選齣有效的榦擾序列;流式細胞儀、DNAladder、PI染色檢測轉染後48 hU251細胞的凋亡狀況,MTT檢測轉染後48 h U251細胞的生長抑製率.結果 RT-PCR、Western Blotting檢測顯示空白對照組、空載體組和無關序列組PRDXⅢmRNA錶達無明顯變化,榦擾序列1、3使PRDXⅢmRNA的錶達明顯降低.DNA ladder顯示榦擾組齣現明顯梯形電泳條帶,空白對照組、空載體組和無關序列組細胞未見明顯梯形電泳條帶.PI染色結果顯示空白對照組,空載體組和無關序列組細胞未見明顯凋亡,而榦擾組細胞覈的染色質高度濃染,部分細胞覈裂解為碎塊,符閤凋亡形態學的改變.FCM檢測結果顯示榦擾組細胞凋亡率明顯高于空白對照組、空載體組、無關序列組(P<0.01).MTT檢測榦擾組對U251細胞生長的抑製率為44.4%,明顯減慢瞭細胞生長(P<0.01).結論 RNAi技術成功地抑製瞭U251細胞中PRDXⅢ基因的錶達,併誘導U251細胞凋亡,錶明PRDXⅢ基因與膠質瘤的凋亡有關,PRDXⅢ基因有可能成為膠質瘤基因治療的靶基因.
목적 탐토RNAi침묵PRDXⅢ기인표체유도U251효질류세포조망.방법 설계합성침대PRDXⅢ적siRNA,지질체개도전염인U251다형효질모세포류세포,RT-PCR법검측전염후24 h PRDXⅢmRNA적표체수평,Western-blotting검측전염후48 h PRDXⅢ단백적표체수평,사선출유효적간우서렬;류식세포의、DNAladder、PI염색검측전염후48 hU251세포적조망상황,MTT검측전염후48 h U251세포적생장억제솔.결과 RT-PCR、Western Blotting검측현시공백대조조、공재체조화무관서렬조PRDXⅢmRNA표체무명현변화,간우서렬1、3사PRDXⅢmRNA적표체명현강저.DNA ladder현시간우조출현명현제형전영조대,공백대조조、공재체조화무관서렬조세포미견명현제형전영조대.PI염색결과현시공백대조조,공재체조화무관서렬조세포미견명현조망,이간우조세포핵적염색질고도농염,부분세포핵렬해위쇄괴,부합조망형태학적개변.FCM검측결과현시간우조세포조망솔명현고우공백대조조、공재체조、무관서렬조(P<0.01).MTT검측간우조대U251세포생장적억제솔위44.4%,명현감만료세포생장(P<0.01).결론 RNAi기술성공지억제료U251세포중PRDXⅢ기인적표체,병유도U251세포조망,표명PRDXⅢ기인여효질류적조망유관,PRDXⅢ기인유가능성위효질류기인치료적파기인.
