CAJ | 학술논문

目的获取人嗜酸粒细胞亲合素(Eotaxin)N端突变体(Met/Eotaxin)重组腺病毒,探讨其在小鼠变应性鼻炎中的作用.方法从人外周血单个核细胞总RNA中克隆人400 bp的Eotaxin基因;通过N端点突变获取Met/Eotaxin基因,构建pAdtrack-CMV-Met/Eotaxin腺病毒穿梭质粒;将该质粒在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒基因组质粒进行同源重组;将Met/Eotaxin重组腺病毒载体在AD293细胞中包装、扩增获取Met/Eotaxin重组腺病毒(Ad-Met/Eotaxin);采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)和蛋白印迹杂交(Western blot)对Met/Eotaxin重组腺病毒的正确性进行鉴定.采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎,40只小鼠随机分为变应性鼻炎组和Ad-Met/Eotaxin组.Ad-Met/Eotaxin组在每次激发前30 min予以每只小鼠2 ml滴度为5×109 pfu/ml的Ad-Met/Eotaxin腹腔注射.比较二组动物变应性鼻炎症状和鼻黏膜形态学改变,并在荧光显微镜下观察腺病毒转染效率标志物--绿色荧光蛋白在鼻黏膜等组织中的表达.结果PCR和Western blot结果显示Ad-Met/Eotaxin构建正确;Ad-Met/Eotaxin腹腔注射后可高效转染小鼠鼻黏膜;Ad-Met/Eotaxin可显著减轻小鼠变应性鼻炎症状以及鼻黏膜形态学改变.结论 Ad-Met/Eotaxin具有阻断小鼠变应性鼻炎的作用.
목적획취인기산립세포친합소(Eotaxin)N단돌변체(Met/Eotaxin)중조선병독,탐토기재소서변응성비염중적작용.방법종인외주혈단개핵세포총RNA중극륭인400 bp적Eotaxin기인;통과N단점돌변획취Met/Eotaxin기인,구건pAdtrack-CMV-Met/Eotaxin선병독천사질립;장해질립재대장간균BJ5183중여선병독기인조질립진행동원중조;장Met/Eotaxin중조선병독재체재AD293세포중포장、확증획취Met/Eotaxin중조선병독(Ad-Met/Eotaxin);채용취합매련식반응(polymerase chain reaction, PCR)화단백인적잡교(Western blot)대Met/Eotaxin중조선병독적정학성진행감정.채용란청단백(ovalbumin, OVA)치민화격발유도소서변응성비염,40지소서수궤분위변응성비염조화Ad-Met/Eotaxin조.Ad-Met/Eotaxin조재매차격발전30 min여이매지소서2 ml적도위5×109 pfu/ml적Ad-Met/Eotaxin복강주사.비교이조동물변응성비염증상화비점막형태학개변,병재형광현미경하관찰선병독전염효솔표지물--록색형광단백재비점막등조직중적표체.결과PCR화Western blot결과현시Ad-Met/Eotaxin구건정학;Ad-Met/Eotaxin복강주사후가고효전염소서비점막;Ad-Met/Eotaxin가현저감경소서변응성비염증상이급비점막형태학개변.결론 Ad-Met/Eotaxin구유조단소서변응성비염적작용.