中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2007年
11期
1407-1410
,共4页
芮云峰%王友%张晓玲%孙红立%曲志虎%戴尅戎
芮雲峰%王友%張曉玲%孫紅立%麯誌虎%戴尅戎
예운봉%왕우%장효령%손홍립%곡지호%대극융
白细胞介素-1受体%白细胞介素-10%基因转染%骨关节炎%软骨细胞
白細胞介素-1受體%白細胞介素-10%基因轉染%骨關節炎%軟骨細胞
백세포개소-1수체%백세포개소-10%기인전염%골관절염%연골세포
目的 探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白(hIL-1Ra)和白细胞介素-10(hIL-10)联合基因转染在人骨关节炎(OA)关节软骨细胞中稳定表达的可行性.方法 构建含目的 基因的表达载体PLXRN-IL-1Ra和FLXRN-IL-10,经酶切及测序鉴定正确后单个或联合转染人OA软骨细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内目的 基因的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-1Ra和hIL-10蛋白表达量的水平.结果 酶切和测序表明获得了与预期结果一致的PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10真核表达载体.稳定转染软骨细胞后,RT-PCR检测到了细胞内hIL-1Ra和hIL-10mRNA片段.ELISA检测发现基因转染组均有相应的一定量的hIL-1Ra和hIL-10表达,单个基因转染组中分别为(60.47±15.13)和(19.73±4.10)ng/L;联合基因转染组为(67.15±11.47)和(16.76±9.96)ng/L.未转染组及PLXRN空质粒转染组均无hIL-1Ra和hIL-10表达,基因转染组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而单个基因转染组和联合基因转染组组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 逆转录病毒载体PLXRN介导的hIL-1Ra和hIL-10联合基因可有效地感染人OA关节软骨细胞并获得稳定表达,为将表达hIL-1Ra和hIL-10目的 基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了依据.
目的 探討逆轉錄病毒載體PLXRN介導的人白細胞介素-1受體拮抗蛋白(hIL-1Ra)和白細胞介素-10(hIL-10)聯閤基因轉染在人骨關節炎(OA)關節軟骨細胞中穩定錶達的可行性.方法 構建含目的 基因的錶達載體PLXRN-IL-1Ra和FLXRN-IL-10,經酶切及測序鑒定正確後單箇或聯閤轉染人OA軟骨細胞,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測細胞內目的 基因的錶達;酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞培養上清液中hIL-1Ra和hIL-10蛋白錶達量的水平.結果 酶切和測序錶明穫得瞭與預期結果一緻的PLXRN-IL-1Ra和PLXRN-IL-10真覈錶達載體.穩定轉染軟骨細胞後,RT-PCR檢測到瞭細胞內hIL-1Ra和hIL-10mRNA片段.ELISA檢測髮現基因轉染組均有相應的一定量的hIL-1Ra和hIL-10錶達,單箇基因轉染組中分彆為(60.47±15.13)和(19.73±4.10)ng/L;聯閤基因轉染組為(67.15±11.47)和(16.76±9.96)ng/L.未轉染組及PLXRN空質粒轉染組均無hIL-1Ra和hIL-10錶達,基因轉染組與對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05),而單箇基因轉染組和聯閤基因轉染組組間差異無統計學意義(P＞0.05).結論 逆轉錄病毒載體PLXRN介導的hIL-1Ra和hIL-10聯閤基因可有效地感染人OA關節軟骨細胞併穫得穩定錶達,為將錶達hIL-1Ra和hIL-10目的 基因的人OA軟骨細胞用于OA基因治療提供瞭依據.
목적 탐토역전록병독재체PLXRN개도적인백세포개소-1수체길항단백(hIL-1Ra)화백세포개소-10(hIL-10)연합기인전염재인골관절염(OA)관절연골세포중은정표체적가행성.방법 구건함목적 기인적표체재체PLXRN-IL-1Ra화FLXRN-IL-10,경매절급측서감정정학후단개혹연합전염인OA연골세포,역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측세포내목적 기인적표체;매련면역흡부시험(ELISA)검측세포배양상청액중hIL-1Ra화hIL-10단백표체량적수평.결과 매절화측서표명획득료여예기결과일치적PLXRN-IL-1Ra화PLXRN-IL-10진핵표체재체.은정전염연골세포후,RT-PCR검측도료세포내hIL-1Ra화hIL-10mRNA편단.ELISA검측발현기인전염조균유상응적일정량적hIL-1Ra화hIL-10표체,단개기인전염조중분별위(60.47±15.13)화(19.73±4.10)ng/L;연합기인전염조위(67.15±11.47)화(16.76±9.96)ng/L.미전염조급PLXRN공질립전염조균무hIL-1Ra화hIL-10표체,기인전염조여대조조비교차이유통계학의의(P＜0.05),이단개기인전염조화연합기인전염조조간차이무통계학의의(P＞0.05).결론 역전록병독재체PLXRN개도적hIL-1Ra화hIL-10연합기인가유효지감염인OA관절연골세포병획득은정표체,위장표체hIL-1Ra화hIL-10목적 기인적인OA연골세포용우OA기인치료제공료의거.
