中国地方病学杂志
中國地方病學雜誌
중국지방병학잡지
CHINESE JOURNAL OF ENDEMIOLOGY
2004年
2期
163-165
,共3页
庄敏%谷鸿喜%孔卫兰%李迪%魏兰兰%李金梁%林道红
莊敏%穀鴻喜%孔衛蘭%李迪%魏蘭蘭%李金樑%林道紅
장민%곡홍희%공위란%리적%위란란%리금량%림도홍
人乳头瘤病毒11型%L1基因%原核表达系统
人乳頭瘤病毒11型%L1基因%原覈錶達繫統
인유두류병독11형%L1기인%원핵표체계통
目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1原核表达系统pBAD(B)-HPV11L1,表达HPVL1蛋白,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础.方法PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript质粒,并测序.将其从克隆重组质粒中切下连入表达载体,建立pBAD(B)-HPV11L1原核表达重组质粒,在大肠杆菌宿主菌Top10中,经阿拉伯糖诱导,表达融合蛋白L1,经SDS-PAGE电泳和Western blot进行鉴定.结果3株HPV11L1经测序发现变异一致,每株均有2个核苷酸变异,但未影响氨基酸变化.经SDS-PAGE鉴定L1蛋白相对分子质量为59×103,与预期值相同,Western blot证明表达蛋白能与单克隆抗体反应,成功构建了pBAD(B)-HPV11L1原核表达系统.结论所构建的pBAD(B)-HPV11L1原核表达系统能够高效表达HPV11L1蛋白.
目的構建人乳頭瘤病毒11型(HPV11)L1原覈錶達繫統pBAD(B)-HPV11L1,錶達HPVL1蛋白,為進一步製備基因工程疫苗奠定基礎.方法PCR法從尖銳濕疣組織標本中擴增人乳頭瘤病毒11型L1基因片段,剋隆至pBluescript質粒,併測序.將其從剋隆重組質粒中切下連入錶達載體,建立pBAD(B)-HPV11L1原覈錶達重組質粒,在大腸桿菌宿主菌Top10中,經阿拉伯糖誘導,錶達融閤蛋白L1,經SDS-PAGE電泳和Western blot進行鑒定.結果3株HPV11L1經測序髮現變異一緻,每株均有2箇覈苷痠變異,但未影響氨基痠變化.經SDS-PAGE鑒定L1蛋白相對分子質量為59×103,與預期值相同,Western blot證明錶達蛋白能與單剋隆抗體反應,成功構建瞭pBAD(B)-HPV11L1原覈錶達繫統.結論所構建的pBAD(B)-HPV11L1原覈錶達繫統能夠高效錶達HPV11L1蛋白.
목적구건인유두류병독11형(HPV11)L1원핵표체계통pBAD(B)-HPV11L1,표체HPVL1단백,위진일보제비기인공정역묘전정기출.방법PCR법종첨예습우조직표본중확증인유두류병독11형L1기인편단,극륭지pBluescript질립,병측서.장기종극륭중조질립중절하련입표체재체,건립pBAD(B)-HPV11L1원핵표체중조질립,재대장간균숙주균Top10중,경아랍백당유도,표체융합단백L1,경SDS-PAGE전영화Western blot진행감정.결과3주HPV11L1경측서발현변이일치,매주균유2개핵감산변이,단미영향안기산변화.경SDS-PAGE감정L1단백상대분자질량위59×103,여예기치상동,Western blot증명표체단백능여단극륭항체반응,성공구건료pBAD(B)-HPV11L1원핵표체계통.결론소구건적pBAD(B)-HPV11L1원핵표체계통능구고효표체HPV11L1단백.
