解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2004年
4期
434-436
,共3页
吴燕%马子敏%刘淑红%范文红%范明
吳燕%馬子敏%劉淑紅%範文紅%範明
오연%마자민%류숙홍%범문홍%범명
方法改进%整体原位杂交%小鼠胚胎
方法改進%整體原位雜交%小鼠胚胎
방법개진%정체원위잡교%소서배태
目的优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法. 方法小鼠胚胎用4%多聚甲醛4℃固定过夜,10mg/L蛋白酶K(PK)室温消化30min,预杂交2h后,加入探针63℃反应16～18h,用盐溶液高温洗涤多次,RNA酶37℃消化1h,封闭4h后加入地高辛抗体4℃过夜.抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇,NBT和BCIP显色系统避光显色.提取图像灰度值,扣除背景、对照等假阳性信号. 结果 KIAA1708探针在脑、脊髓等8个区域有杂交信号,对图像数据分析结果表明,只有1个区域的信号在95%可信限范围内,为阳性信号. 结论通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度,以及洗涤、显色过程,得到了低本底、着色清晰的杂交结果,结合图像的数据分析步骤,消除假阳性结果.建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法.
目的優化小鼠胚胎整體原位雜交及數據分析方法. 方法小鼠胚胎用4%多聚甲醛4℃固定過夜,10mg/L蛋白酶K(PK)室溫消化30min,預雜交2h後,加入探針63℃反應16～18h,用鹽溶液高溫洗滌多次,RNA酶37℃消化1h,封閉4h後加入地高辛抗體4℃過夜.抗體反應後反複洗滌併在水平搖床上振搖,NBT和BCIP顯色繫統避光顯色.提取圖像灰度值,釦除揹景、對照等假暘性信號. 結果 KIAA1708探針在腦、脊髓等8箇區域有雜交信號,對圖像數據分析結果錶明,隻有1箇區域的信號在95%可信限範圍內,為暘性信號. 結論通過控製蛋白酶K消化時間、探針和地高辛抗體濃度,以及洗滌、顯色過程,得到瞭低本底、著色清晰的雜交結果,結閤圖像的數據分析步驟,消除假暘性結果.建立瞭一套實用的小鼠胚胎整體原位雜交方法.
목적우화소서배태정체원위잡교급수거분석방법. 방법소서배태용4%다취갑철4℃고정과야,10mg/L단백매K(PK)실온소화30min,예잡교2h후,가입탐침63℃반응16～18h,용염용액고온세조다차,RNA매37℃소화1h,봉폐4h후가입지고신항체4℃과야.항체반응후반복세조병재수평요상상진요,NBT화BCIP현색계통피광현색.제취도상회도치,구제배경、대조등가양성신호. 결과 KIAA1708탐침재뇌、척수등8개구역유잡교신호,대도상수거분석결과표명,지유1개구역적신호재95%가신한범위내,위양성신호. 결론통과공제단백매K소화시간、탐침화지고신항체농도,이급세조、현색과정,득도료저본저、착색청석적잡교결과,결합도상적수거분석보취,소제가양성결과.건립료일투실용적소서배태정체원위잡교방법.
