CAJ | 학술논문

目的:以基因转染为平台,利用脂质体将血管内皮生长因子基因转入骨髓间质干细胞,使其可以在作为种子细胞的同时,作为基因治疗的载体将血管内皮生长因子基因导入缺血组织,从而为探索一种更加有效的缺血性心脏病治疗方法提供实验室基础.方法:实验于2004-07/2005-03在解放军第二军医大学医学遗传实验室及上海交通大学附属第一人民医院心内科实验室完成.①分离、培养、鉴定大鼠骨髓间质干细胞.②试验组用构建好的PcDNA3.1-VEGF进行基因转染,阳性对照组用PcDNA3.1空质粒进行转染,阴性对照组只加入培养液.③收集各组第1,3,5,7,9,11天的上清液,用ELISA法测定培养上清液中血管内皮生长因子的浓度;提取阳性克隆的细胞蛋白;进行Western blot分析;用四甲基偶氮唑盐法检测转染后血管内皮生长因子的表达对骨髓间质干细胞增殖的影响.结果:①免疫组织化学示所培养细胞CD106+,CD34-.②ELISA方法示质粒转染细胞后第2天,上清液中即可出现血管内皮生长因子浓度的增高,第5天时达到高峰,以后逐渐降低,10 d后趋于稳定,但其浓度仍高于对照组.③Western b1ot示转染组血管内皮生长因子蛋白浓度明显高于空质粒转染组和未转染组.④四甲基偶氮唑盐示转染后血管内皮生长因子的表达可以促进骨髓间质干细胞的增殖.结论:血管内皮生长因子成功转染骨髓间质干细胞,血管内皮生长因子的表达促进了骨髓间质干细胞的增殖,从而可以将促血管生长因子治疗和干细胞移植有效的结合起来.
목적:이기인전염위평태,이용지질체장혈관내피생장인자기인전입골수간질간세포,사기가이재작위충자세포적동시,작위기인치료적재체장혈관내피생장인자기인도입결혈조직,종이위탐색일충경가유효적결혈성심장병치료방법제공실험실기출.방법:실험우2004-07/2005-03재해방군제이군의대학의학유전실험실급상해교통대학부속제일인민의원심내과실험실완성.①분리、배양、감정대서골수간질간세포.②시험조용구건호적PcDNA3.1-VEGF진행기인전염,양성대조조용PcDNA3.1공질립진행전염,음성대조조지가입배양액.③수집각조제1,3,5,7,9,11천적상청액,용ELISA법측정배양상청액중혈관내피생장인자적농도;제취양성극륭적세포단백;진행Western blot분석;용사갑기우담서염법검측전염후혈관내피생장인자적표체대골수간질간세포증식적영향.결과:①면역조직화학시소배양세포CD106+,CD34-.②ELISA방법시질립전염세포후제2천,상청액중즉가출현혈관내피생장인자농도적증고,제5천시체도고봉,이후축점강저,10 d후추우은정,단기농도잉고우대조조.③Western b1ot시전염조혈관내피생장인자단백농도명현고우공질립전염조화미전염조.④사갑기우담서염시전염후혈관내피생장인자적표체가이촉진골수간질간세포적증식.결론:혈관내피생장인자성공전염골수간질간세포,혈관내피생장인자적표체촉진료골수간질간세포적증식,종이가이장촉혈관생장인자치료화간세포이식유효적결합기래.