CAJ | 학술논문

[目的]寻求能够快速定性/定量检测4种传染病及其病原体的试验方法.[方法]应用双抗体夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测炭疽杆菌芽孢(以下简称炭疽芽孢)、鼠疫杆菌、肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(以下简称EHEC O157),评价方法的灵敏性、特异性.通过分别检测模拟掺入3种菌/芽孢的"白色粉末"和检测3种细菌的强毒株,评价在实际环境样品检测中的应用.应用双抗原夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测鼠疫F1抗体、SARS病毒抗体,检测239份青海鼠疫疫区人员血清、1 236份新疆鼠疫疫源地鼠血清,检测18份恢复期SARS病人血清和9份健康对照者血清,以及206份出入境健康人员血清,考核2种检测抗体的方法在实际样品检测中的应用.通过比较炭疽杆菌、鼠疫杆菌、大肠埃希菌O157以及鼠疫杆菌抗体、SARS病毒抗体的胶体金免疫层析方法、UCP免疫层析方法,比较我们建立的2套系统与加拿大RAMP系统检测炭疽杆菌的能力.[结果]UCP免疫层析方法能在35min内完成检测,炭疽芽孢检测掺入"白色粉末"的样品灵敏性为1×104cfu/test,炭疽芽孢最低检测限为1×105cfu/ml(原溶液芽孢浓度),多种不同的芽孢菌及其它细菌共38种54株检测说明该法特异性良好,仅与腊样芽孢杆菌有交叉反应,特异性为97%;鼠疫杆菌检测灵敏性为5×104cfu/ml,最低检测菌数为5×103cfu/test,在107cfu/ml水平上未发现与30余种细菌有交叉反应,包括最近缘假结核耶尔森菌;EHEC O157检测灵敏性为1×103cfu/ml,仅与弗氏枸橼酸杆菌有交叉反应,特异性为98%.胶体金免疫层析方法能在10min内完成检测,炭疽芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157检测灵敏度分别为1×106cfu/ml、1×105cfu/ml、1×105cfu/ml,"白色粉末"等环境样品最低可检测敏感性为1×105cfu,1×104cfu,1×104cfu/test.胶体金免疫层析方法分别应用于炭疽、鼠疫强毒株的检测,检测限为5×104cfu/test和7×104cfu/test.在实际血清样品检测中,与间接血凝方法对比,鼠疫抗体UCP和胶体金免疫层析方法有更好的敏感性.血清样品检测显示,SARS抗体的胶体金和UCP免疫层析方法均有较好的特异性和敏感性.[结论]2种免疫层析方法都有快速、敏感、特异的特点:上转磷光免疫层析方法可实现定量检测,敏感性优于胶体金免疫层析法;炭疽检测与加拿大RAMP检测系统相当;胶体金免疫层析法具有简便、直观、易行的特点.2种免疫层析方法均适合于炭疽芽孢芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157、鼠疫杆菌抗体、SARS抗体的现场检测和筛查. [目的]尋求能夠快速定性/定量檢測4種傳染病及其病原體的試驗方法.[方法]應用雙抗體夾心法,建立膠體金免疫層析法、上轉燐光(UCP)免疫層析法檢測炭疽桿菌芽孢(以下簡稱炭疽芽孢)、鼠疫桿菌、腸齣血性大腸埃希菌O157∶H7(以下簡稱EHEC O157),評價方法的靈敏性、特異性.通過分彆檢測模擬摻入3種菌/芽孢的"白色粉末"和檢測3種細菌的彊毒株,評價在實際環境樣品檢測中的應用.應用雙抗原夾心法,建立膠體金免疫層析法、上轉燐光(UCP)免疫層析法檢測鼠疫F1抗體、SARS病毒抗體,檢測239份青海鼠疫疫區人員血清、1 236份新疆鼠疫疫源地鼠血清,檢測18份恢複期SARS病人血清和9份健康對照者血清,以及206份齣入境健康人員血清,攷覈2種檢測抗體的方法在實際樣品檢測中的應用.通過比較炭疽桿菌、鼠疫桿菌、大腸埃希菌O157以及鼠疫桿菌抗體、SARS病毒抗體的膠體金免疫層析方法、UCP免疫層析方法,比較我們建立的2套繫統與加拿大RAMP繫統檢測炭疽桿菌的能力.[結果]UCP免疫層析方法能在35min內完成檢測,炭疽芽孢檢測摻入"白色粉末"的樣品靈敏性為1×104cfu/test,炭疽芽孢最低檢測限為1×105cfu/ml(原溶液芽孢濃度),多種不同的芽孢菌及其它細菌共38種54株檢測說明該法特異性良好,僅與臘樣芽孢桿菌有交扠反應,特異性為97%;鼠疫桿菌檢測靈敏性為5×104cfu/ml,最低檢測菌數為5×103cfu/test,在107cfu/ml水平上未髮現與30餘種細菌有交扠反應,包括最近緣假結覈耶爾森菌;EHEC O157檢測靈敏性為1×103cfu/ml,僅與弗氏枸櫞痠桿菌有交扠反應,特異性為98%.膠體金免疫層析方法能在10min內完成檢測,炭疽芽孢、鼠疫桿菌、EHEC O157檢測靈敏度分彆為1×106cfu/ml、1×105cfu/ml、1×105cfu/ml,"白色粉末"等環境樣品最低可檢測敏感性為1×105cfu,1×104cfu,1×104cfu/test.膠體金免疫層析方法分彆應用于炭疽、鼠疫彊毒株的檢測,檢測限為5×104cfu/test和7×104cfu/test.在實際血清樣品檢測中,與間接血凝方法對比,鼠疫抗體UCP和膠體金免疫層析方法有更好的敏感性.血清樣品檢測顯示,SARS抗體的膠體金和UCP免疫層析方法均有較好的特異性和敏感性.[結論]2種免疫層析方法都有快速、敏感、特異的特點:上轉燐光免疫層析方法可實現定量檢測,敏感性優于膠體金免疫層析法;炭疽檢測與加拿大RAMP檢測繫統相噹;膠體金免疫層析法具有簡便、直觀、易行的特點.2種免疫層析方法均適閤于炭疽芽孢芽孢、鼠疫桿菌、EHEC O157、鼠疫桿菌抗體、SARS抗體的現場檢測和篩查.
[목적]심구능구쾌속정성/정량검측4충전염병급기병원체적시험방법.[방법]응용쌍항체협심법,건립효체금면역층석법、상전린광(UCP)면역층석법검측탄저간균아포(이하간칭탄저아포)、서역간균、장출혈성대장애희균O157∶H7(이하간칭EHEC O157),평개방법적령민성、특이성.통과분별검측모의참입3충균/아포적"백색분말"화검측3충세균적강독주,평개재실제배경양품검측중적응용.응용쌍항원협심법,건립효체금면역층석법、상전린광(UCP)면역층석법검측서역F1항체、SARS병독항체,검측239빈청해서역역구인원혈청、1 236빈신강서역역원지서혈청,검측18빈회복기SARS병인혈청화9빈건강대조자혈청,이급206빈출입경건강인원혈청,고핵2충검측항체적방법재실제양품검측중적응용.통과비교탄저간균、서역간균、대장애희균O157이급서역간균항체、SARS병독항체적효체금면역층석방법、UCP면역층석방법,비교아문건립적2투계통여가나대RAMP계통검측탄저간균적능력.[결과]UCP면역층석방법능재35min내완성검측,탄저아포검측참입"백색분말"적양품령민성위1×104cfu/test,탄저아포최저검측한위1×105cfu/ml(원용액아포농도),다충불동적아포균급기타세균공38충54주검측설명해법특이성량호,부여석양아포간균유교차반응,특이성위97%;서역간균검측령민성위5×104cfu/ml,최저검측균수위5×103cfu/test,재107cfu/ml수평상미발현여30여충세균유교차반응,포괄최근연가결핵야이삼균;EHEC O157검측령민성위1×103cfu/ml,부여불씨구연산간균유교차반응,특이성위98%.효체금면역층석방법능재10min내완성검측,탄저아포、서역간균、EHEC O157검측령민도분별위1×106cfu/ml、1×105cfu/ml、1×105cfu/ml,"백색분말"등배경양품최저가검측민감성위1×105cfu,1×104cfu,1×104cfu/test.효체금면역층석방법분별응용우탄저、서역강독주적검측,검측한위5×104cfu/test화7×104cfu/test.재실제혈청양품검측중,여간접혈응방법대비,서역항체UCP화효체금면역층석방법유경호적민감성.혈청양품검측현시,SARS항체적효체금화UCP면역층석방법균유교호적특이성화민감성.[결론]2충면역층석방법도유쾌속、민감、특이적특점:상전린광면역층석방법가실현정량검측,민감성우우효체금면역층석법;탄저검측여가나대RAMP검측계통상당;효체금면역층석법구유간편、직관、역행적특점.2충면역층석방법균괄합우탄저아포아포、서역간균、EHEC O157、서역간균항체、SARS항체적현장검측화사사.