中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
6期
667-671
,共5页
谭业平%孙晓义%卢强%李莲瑞%邓洪宽%付宝权
譚業平%孫曉義%盧彊%李蓮瑞%鄧洪寬%付寶權
담업평%손효의%로강%리련서%산홍관%부보권
鲤鱼%IL-8%cDNA克隆%鉴定%差异表达分析
鯉魚%IL-8%cDNA剋隆%鑒定%差異錶達分析
리어%IL-8%cDNA극륭%감정%차이표체분석
用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A26,经地高辛标记作为探针时有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆.序列分析表明该克隆含有1个大小为294 bp编码98个氨基酸的完整开放阅读框,氨基酸序列含有Chemokine-CXC功能结构域,前体中舍有22个氨基酸组成的引导肽,氨基酸序列比对显示成熟白细胞介素-8(IL～8)多肽中第12、13和14构成CXC基序,但之前无ELR基序.系统发生分析其与荷兰鲤鱼亲缘关系最近,氨基酸序列的同源性达89％.分离培养鲤鱼外周血白细胞,在不同条件下经LPS、PHA和ConA刺激后,提取总RNA,根据鲤鱼IL-8全长cDNA序列和β-ac-tin序列设计引物,利用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对鲤鱼外周血白细胞IL-8进行差异表达分析,结果显示.经有丝分裂原刺激后前期(4 h)白细胞中IL-8的表达量明显增大,但随着时间推移(12、24 h)并不一直比同期正常白细胞表达量大,表达量趋势成峰形图.
用DD-RTPCR的方法穫得差異顯示片段A26,經地高辛標記作為探針時有絲分裂原刺激的鯉魚外週血白細胞cDNA文庫覈痠雜交篩選,從0.8×104箇重組噬菌體中,經過2輪篩選穫得暘性剋隆.序列分析錶明該剋隆含有1箇大小為294 bp編碼98箇氨基痠的完整開放閱讀框,氨基痠序列含有Chemokine-CXC功能結構域,前體中捨有22箇氨基痠組成的引導肽,氨基痠序列比對顯示成熟白細胞介素-8(IL～8)多肽中第12、13和14構成CXC基序,但之前無ELR基序.繫統髮生分析其與荷蘭鯉魚親緣關繫最近,氨基痠序列的同源性達89％.分離培養鯉魚外週血白細胞,在不同條件下經LPS、PHA和ConA刺激後,提取總RNA,根據鯉魚IL-8全長cDNA序列和β-ac-tin序列設計引物,利用半定量反轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)方法對鯉魚外週血白細胞IL-8進行差異錶達分析,結果顯示.經有絲分裂原刺激後前期(4 h)白細胞中IL-8的錶達量明顯增大,但隨著時間推移(12、24 h)併不一直比同期正常白細胞錶達量大,錶達量趨勢成峰形圖.
용DD-RTPCR적방법획득차이현시편단A26,경지고신표기작위탐침시유사분렬원자격적리어외주혈백세포cDNA문고핵산잡교사선,종0.8×104개중조서균체중,경과2륜사선획득양성극륭.서렬분석표명해극륭함유1개대소위294 bp편마98개안기산적완정개방열독광,안기산서렬함유Chemokine-CXC공능결구역,전체중사유22개안기산조성적인도태,안기산서렬비대현시성숙백세포개소-8(IL～8)다태중제12、13화14구성CXC기서,단지전무ELR기서.계통발생분석기여하란리어친연관계최근,안기산서렬적동원성체89％.분리배양리어외주혈백세포,재불동조건하경LPS、PHA화ConA자격후,제취총RNA,근거리어IL-8전장cDNA서렬화β-ac-tin서렬설계인물,이용반정량반전록취합매련식반응(RT-PCR)방법대리어외주혈백세포IL-8진행차이표체분석,결과현시.경유사분렬원자격후전기(4 h)백세포중IL-8적표체량명현증대,단수착시간추이(12、24 h)병불일직비동기정상백세포표체량대,표체량추세성봉형도.
