CAJ | 학술논문

目的:构建大鼠缝隙连接蛋白43(Cx43)基因的重组慢病毒表达载体,并转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),观察Cx43的表达.方法:采用RT-PCR技术获得大鼠Cx43基因,并将其连接到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pGC-FU中,重组获得慢病毒质粒pGC-FU-Cx43,将其与辅助包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)一起共转染293T细胞,包装生产病毒并测定滴度.所获慢病毒感染大鼠BMSC后,采用荧光显微镜和Western blot方法检测Cx43的表达.结果:酶切证实Cx43基因已定向连入目的载体,测序结果显示,所构建的pGC-FU-Cx43重组慢病毒质粒序列与目标序列完全一致.获得的病毒滴度为2×109 TU/ml.经分离、纯化得到BMSC;pGC-FU-Cx43转染BMSC后,可见大量 EGFP表达, Cx43的表达量明显增加.结论:成功构建并包装获得较高滴度的重组慢病毒pGC-FU-Cx43.pGC-FU-Cx43可高效转染BMSC,Cx43表达增加,且实现稳定转染.
목적:구건대서봉극련접단백43(Cx43)기인적중조만병독표체재체,병전염대서골수간충질간세포(BMSC),관찰Cx43적표체.방법:채용RT-PCR기술획득대서Cx43기인,병장기련접도함유증강형록색형광단백(EGFP)기인적만병독표체재체pGC-FU중,중조획득만병독질립pGC-FU-Cx43,장기여보조포장질립(pHelper1.0、pHelper2.0)일기공전염293T세포,포장생산병독병측정적도.소획만병독감염대서BMSC후,채용형광현미경화Western blot방법검측Cx43적표체.결과:매절증실Cx43기인이정향련입목적재체,측서결과현시,소구건적pGC-FU-Cx43중조만병독질립서렬여목표서렬완전일치.획득적병독적도위2×109 TU/ml.경분리、순화득도BMSC;pGC-FU-Cx43전염BMSC후,가견대량 EGFP표체, Cx43적표체량명현증가.결론:성공구건병포장획득교고적도적중조만병독pGC-FU-Cx43.pGC-FU-Cx43가고효전염BMSC,Cx43표체증가,차실현은정전염.