畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
2期
48-50
,共3页
猪附红细胞体%A1基因%克隆%表达
豬附紅細胞體%A1基因%剋隆%錶達
저부홍세포체%A1기인%극륭%표체
采用PCR方法扩增吉林延边地区猪附红细胞体A1基因片段,将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序；分别构建A1重组pGEX-4T-1和PET-28-a表达质粒,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析.结果显示:克隆的A1基因片段长1 044 bp,含有1个999 bp的开放阅读框,编码333个氨基酸,与GenBank中A1基因序列(AM265536)的同源性为97％；表达的融合蛋白分子量分别为64ku和40 ku,能被猪附红细胞体阳性血清识别.表明该融合蛋白具有较好的免疫反应活性.
採用PCR方法擴增吉林延邊地區豬附紅細胞體A1基因片段,將擴增產物與pMD18-T載體連接,重組質粒經PCR、酶切鑒定後測序；分彆構建A1重組pGEX-4T-1和PET-28-a錶達質粒,經IPTG誘導錶達後,進行SDS-PAGE、Western blot分析.結果顯示:剋隆的A1基因片段長1 044 bp,含有1箇999 bp的開放閱讀框,編碼333箇氨基痠,與GenBank中A1基因序列(AM265536)的同源性為97％；錶達的融閤蛋白分子量分彆為64ku和40 ku,能被豬附紅細胞體暘性血清識彆.錶明該融閤蛋白具有較好的免疫反應活性.
채용PCR방법확증길림연변지구저부홍세포체A1기인편단,장확증산물여pMD18-T재체련접,중조질립경PCR、매절감정후측서；분별구건A1중조pGEX-4T-1화PET-28-a표체질립,경IPTG유도표체후,진행SDS-PAGE、Western blot분석.결과현시:극륭적A1기인편단장1 044 bp,함유1개999 bp적개방열독광,편마333개안기산,여GenBank중A1기인서렬(AM265536)적동원성위97％；표체적융합단백분자량분별위64ku화40 ku,능피저부홍세포체양성혈청식별.표명해융합단백구유교호적면역반응활성.
