中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2006年
3期
148-151
,共4页
朱翔%闵太善%高胜兰%王勇平%陆惠民%黄伟达
硃翔%閔太善%高勝蘭%王勇平%陸惠民%黃偉達
주상%민태선%고성란%왕용평%륙혜민%황위체
弓形虫属%细胞质颗粒%抗原,原虫%重组融合蛋白质类%基因表达
弓形蟲屬%細胞質顆粒%抗原,原蟲%重組融閤蛋白質類%基因錶達
궁형충속%세포질과립%항원,원충%중조융합단백질류%기인표체
目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫GRA6抗原,为制作弓形虫感染基因工程诊断试剂盒奠定基础.方法将重组pGEX-GRA6表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达.超声破壁后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物的表达形式,并对表达产物以硫酸铵沉淀、Sephedax G50脱盐和GST亲和层析柱进行目的蛋白的纯化.通过Western blotting检测其纯化的重组抗原的免疫反应性.结果GRA6以融合蛋白(GST-GRA6)的形式在大肠埃希菌中得到了高效表达.对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达.在上清液中表达的可溶性蛋白经纯化后蛋白纯度可达90%以上.Western blotting分析表明纯化蛋白能被弓形虫感染的人血清所识别.结论GRA6在大肠埃希菌中得到了高效表达,重组抗原经纯化后能特异性地被弓形虫感染者血清所识别.
目的在大腸埃希菌中高效錶達及純化弓形蟲GRA6抗原,為製作弓形蟲感染基因工程診斷試劑盒奠定基礎.方法將重組pGEX-GRA6錶達載體轉化大腸埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株,在異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導下錶達.超聲破壁後,通過十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析錶達產物的錶達形式,併對錶達產物以硫痠銨沉澱、Sephedax G50脫鹽和GST親和層析柱進行目的蛋白的純化.通過Western blotting檢測其純化的重組抗原的免疫反應性.結果GRA6以融閤蛋白(GST-GRA6)的形式在大腸埃希菌中得到瞭高效錶達.對錶達產物可溶性分析錶明,錶達蛋白在上清液中和包涵體中均有錶達.在上清液中錶達的可溶性蛋白經純化後蛋白純度可達90%以上.Western blotting分析錶明純化蛋白能被弓形蟲感染的人血清所識彆.結論GRA6在大腸埃希菌中得到瞭高效錶達,重組抗原經純化後能特異性地被弓形蟲感染者血清所識彆.
목적재대장애희균중고효표체급순화궁형충GRA6항원,위제작궁형충감염기인공정진단시제합전정기출.방법장중조pGEX-GRA6표체재체전화대장애희균BL21-Codon Plus(DE3)-RP균주,재이병기류대-β-D반유당감(IPTG)유도하표체.초성파벽후,통과십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석표체산물적표체형식,병대표체산물이류산안침정、Sephedax G50탈염화GST친화층석주진행목적단백적순화.통과Western blotting검측기순화적중조항원적면역반응성.결과GRA6이융합단백(GST-GRA6)적형식재대장애희균중득도료고효표체.대표체산물가용성분석표명,표체단백재상청액중화포함체중균유표체.재상청액중표체적가용성단백경순화후단백순도가체90%이상.Western blotting분석표명순화단백능피궁형충감염적인혈청소식별.결론GRA6재대장애희균중득도료고효표체,중조항원경순화후능특이성지피궁형충감염자혈청소식별.
