CAJ | 학술논문

本课题研究了氯化镉(CdCl2)诱导HEK293细胞(人胚胎肾细胞系)的凋亡,初步探讨了凋亡过程中Caspase-3、Bcl-2的变化和凋亡诱导因子(AIF)的转移以及它们的意义.MTT法检测CdCl2对HEK293细胞增殖的抑制作用;通过倒置显微镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、激光共聚焦观察细胞凋亡;应用Western blot法和荧光免疫法测定Caspase-3酶原、Bcl-2蛋白的变化以及检测AIF蛋白在细胞中的定位.结果显示:CdCl2对HEK293细胞具有显著的生长抑制作用,并呈明显的剂量和时间依赖性.在琼脂糖凝胶电泳中,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,其中30μmol/L作用6-9 h梯状条带最为清晰,时间过长或浓度过高则梯状条带逐渐模糊,表明镉浓度过高或处理时间过长,细胞有坏死.流式细胞仪检测也印证了这一结果.形态学观察可见明显的细胞凋亡特征.同时线粒体膜电位明显下降,发现Caspase-3酶原蛋白、Bcl-2蛋白含量减少,并具有时间依赖性;另外检测到线粒体AIF向细胞核转移.而Bcl-2转染后有一定的抑制凋亡作用.实验结果提示,CdCl2能够诱导HEK293细胞凋亡,线粒体损伤导致AIF转移与细胞色素c释放,从而引发的非Caspases与Caspases凋亡途径可能在镉引发的细胞凋亡过程中起重要作用,而Caspase-3,Bcl-2起着重要的调控作用.
본과제연구료록화력(CdCl2)유도HEK293세포(인배태신세포계)적조망,초보탐토료조망과정중Caspase-3、Bcl-2적변화화조망유도인자(AIF)적전이이급타문적의의.MTT법검측CdCl2대HEK293세포증식적억제작용;통과도치현미경、전경、경지당응효전영、류식세포술、격광공취초관찰세포조망;응용Western blot법화형광면역법측정Caspase-3매원、Bcl-2단백적변화이급검측AIF단백재세포중적정위.결과현시:CdCl2대HEK293세포구유현저적생장억제작용,병정명현적제량화시간의뢰성.재경지당응효전영중,현시유조망세포특유적DNA제상조대,기중30μmol/L작용6-9 h제상조대최위청석,시간과장혹농도과고칙제상조대축점모호,표명력농도과고혹처리시간과장,세포유배사.류식세포의검측야인증료저일결과.형태학관찰가견명현적세포조망특정.동시선립체막전위명현하강,발현Caspase-3매원단백、Bcl-2단백함량감소,병구유시간의뢰성;령외검측도선립체AIF향세포핵전이.이Bcl-2전염후유일정적억제조망작용.실험결과제시,CdCl2능구유도HEK293세포조망,선립체손상도치AIF전이여세포색소c석방,종이인발적비Caspases여Caspases조망도경가능재력인발적세포조망과정중기중요작용,이Caspase-3,Bcl-2기착중요적조공작용.